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[请教] 请问哪一种药物处理掉透明带比较简便啊   [复制链接]

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楼主
发表于 2011-4-20 22:22 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
如题,另外希望答复的高手附加上操作步骤就更好了!/ y0 `9 `9 U3 x6 N
谢谢
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沙发
发表于 2011-4-20 22:58 |只看该作者
回复 懵懂干细胞 的帖子! y; Z) X- a2 j) v
7 h# l8 Z8 O* q- X  d5 x0 w) f) W
酸性台式液,处理简单,1分钟即可,但是对胚胎损伤比较大。还有一个东西可以用来处理,我忘记了。。。
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藤椅
发表于 2011-4-20 23:50 |只看该作者
回复 a2782953 的帖子  h( ~+ ^8 f& R+ G2 ]6 M
1 X& C1 b4 R1 L7 h3 g( A# c  L
谢谢赐教!3 Z7 z: d/ s# g8 N9 T
就是acid tyrode solution吧!
1 d9 ~# R' Y; |$ n& }, {" b这个药物听说过,1Min钟处理没有浓度要求吗?7 x4 k9 o$ x& \! C9 x/ Z6 v
是一个什么规格的?
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板凳
发表于 2011-4-21 08:38 |只看该作者
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听说链酶蛋白酶可以去透明带,链酶蛋白酶:free-serum of media:serum=1:1:1,将卵或者胚胎放入酶中消化(37度),即使观察消化情况。我没有做过这个实验,具体细节不是很明白。
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报纸
发表于 2011-4-21 09:28 |只看该作者
回复 BenHantun 的帖子7 h0 u- R1 o- N) i: X
4 m; n8 W! t/ |# a, a' Y% O2 O
谢谢!

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地板
发表于 2011-4-21 13:39 |只看该作者
研究蛋白用酸性PBS(PH值2-2.5),研究mRNA用蛋白酶K(1mg/ml)
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发表于 2011-4-21 14:01 |只看该作者
本帖最后由 微微一笑 于 2011-4-21 14:04 编辑
% T8 L( r- T6 \3 n  f# S4 z# w  {* l2 e2 J$ x
我以前去透明带是这样做的:5mg/l(0.5%)的链蛋白酶中进行消化1min然后移入PH2.1的酸性台氏液中消化1~2min。觉得效果很好。之后胚胎用于染色,所以有没有损伤,就没有太在意,但是之后染色效果很好。
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发表于 2011-4-21 15:14 |只看该作者
我用过两种溶液去透明带,一是楼上所说台式酸溶液,1min室温下很快就溶解掉了。第二中是M2配的链酶蛋白酶,一般7-8min吧,但是一定要放在培养箱里,不然时间还要长。不过,我印象中记得好像透明质酸酶也可以,各位高手,有用过的吗?
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发表于 2011-5-1 19:53 |只看该作者
我用的是0.5%的链酶蛋白酶,一般处理5~8分钟吧,挺好用的,处理完的小鼠胚胎继续养,都能活下来呢,也能养到囊胚,效果不错的,你可以试试
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发表于 2011-5-1 20:24 |只看该作者
呵呵,我是做手工克隆的,最简单最常用对胚胎损伤比较少的是链酶蛋白酶,浓度0.3-0.5%均可以,不用计算时间,只要在显微镜下观察即可,待透明带消化差不多后立即转到高血清液体即可!呵呵
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