求胚胎干细胞的冷冻方法

随心

这边做的是小鼠胚胎干细胞，用3.5cm板养的，具体步骤如下：
+ |# V# P, L2 \* L& z& h1.提前将保温杯放入-20℃待用.6 n2 n6 i1 q/ o5 x4 v3 D
2.提前两小时给干细胞换液.
8 P6 ~# e1 t# V2 a5 |0 U3.开始冻存,把培养基去掉,用pbs洗一至两遍，加1ml胰酶消化1min。
5 d) e" u$ j7 Q2 r" R7 ^( g4，去掉胰酶，加1ml培养基把细胞吹打下来，加入离心管，1000r，一般我们离7min。2 z7 |0 D, l/ _# ]  N
5.加入1ml培养基吹打均匀
" H2 |) H* z+ m: E. L) U% }( e6，加入10%-15%的二甲基亚砜，根据细胞的多少，大概冻几管，计算好DMSO的量。一般一管2乘10的六次方左右最好。! ^6 z+ v0 u/ ~: T
7，分装冻存管，每管大概总液1ml.
' v7 C0 E, C0 V; @, v! a2 A+ X8.把冻存管放入预先准备好的保温杯中。
" h7 R0 F# a0 ^" o1 k- L9，送至-80℃过夜。
3 S& I& F" o& k& p) Y: E10.第二天一早转移至液氮中，做好记录就可以了。
! b) W. {" r+ o9 @/ H我们一般晚上冻存，这样做完直接送至-80℃过夜了，时间正好。