脐带间充质细胞原代培养

gaorongbest

我们在做脐带间充质原代时，用组织块培养到5-7天时可以看到细胞爬出来；但是用胶原酶消化1小时却没有什么细胞呢？怎么用消化法消化的细胞多一些呢，我们是加等倍体积的胶原酶，请大家指点一下阿

sunjianhua2000

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% p. p+ B! {8 ?
! ?$ G- Z( }8 ~9 w6 S/ a我也正在做脐带间充质干细胞培养，从目前所查文献了解到，消化法现在用的双酶法比较多，你可以查资料参考下！

gaorongbest

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- Y$ [8 ^0 a. e# L" A4 Y
' j. e9 B  v! k- v+ w# W我们单用胶原酶消化的，1小时后没有细胞，你用消化法做的好不好？双酶中的另一种是胰酶吗？你做的效果好不好？6 w5 @; ]8 F# n

leungyk

2 v6 O1 j( h/ ?3 N( @4 U4 n  l7 \4 v1 N) J' {& v6 [& R- }- U
我們用胶原酶，一般於37度消化兩小時後,有3-10 x10^6 細胞 (指總細胞量，不是MSC)，當然，這跟臍帶長度乜有很大的關係。

zarecol

你用的是哪种胶原酶？一般二型胶原酶消化20分钟左右效果就很好了，你如果消化1小时没有细胞的话，可以考虑胶原酶的浓度是不是过低，另外，消化前最好做预处理，将脐带剪成小块再消化，使酶液和试验品充分接触。

柏林小杨

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6 T: y# z0 L! y; r. Z2 ~  `你的胶原酶的PH是多少啊？

gaorongbest

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9 F: X6 o' J& a5 M0 `5 h
' U/ O( @1 u1 T2 {3 m; F我们用的是一型胶原酶，没用过二型的，是300个单位的浓度，应该不算低吧，我们是将血管什么的去掉后剪成小块消化的，两次了，都没有细胞。

gaorongbest

回复 柏林小杨 的帖子$ ^0 k5 ~/ ^  z; T) _1 V3 P
: f# K2 n; b) C
我们没测过胶原酶的pH，一般都是现配的胶原酶。

柏林小杨

回复 gaorongbest 的帖子1 E0 f* x) q# K* j/ `
  ]& ~  N* _3 e7 n4 D
那你得找找细胞是怎么变没的了

zarecol

回复 gaorongbest 的帖子' o3 E1 T5 X" w# z2 T$ X

/ X4 J! Y. [* `8 [没有细胞？我不知道你指的是什么，消化后肯定有细胞，即便你剪碎后不去消化，直接收集起来过滤离心后也是有细胞的，我想没有细胞的话，可能是因为你在消化之后没有充足的清洗，导致细胞悬液的密度过高，离心不足以使细胞沉降，你可以消化后多洗几次或者改用组织块法，希望能帮到你。