脐带间充质细胞原代培养

gaorongbest

我们在做脐带间充质原代时，用组织块培养到5-7天时可以看到细胞爬出来；但是用胶原酶消化1小时却没有什么细胞呢？怎么用消化法消化的细胞多一些呢，我们是加等倍体积的胶原酶，请大家指点一下阿

sunjianhua2000

回复 gaorongbest 的帖子6 W0 n  h2 \( y4 K' }6 h
. w! p( t4 ?+ L  y9 v
我也正在做脐带间充质干细胞培养，从目前所查文献了解到，消化法现在用的双酶法比较多，你可以查资料参考下！

gaorongbest

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7 f/ l4 l$ h  I0 m5 J- C! l2 _3 f. M, v
我们单用胶原酶消化的，1小时后没有细胞，你用消化法做的好不好？双酶中的另一种是胰酶吗？你做的效果好不好？: J1 w4 M4 d" a& B

leungyk

) _8 @8 l# o* F, S. T

7 ?2 \; T2 P3 H6 v我們用胶原酶，一般於37度消化兩小時後,有3-10 x10^6 細胞 (指總細胞量，不是MSC)，當然，這跟臍帶長度乜有很大的關係。

zarecol

你用的是哪种胶原酶？一般二型胶原酶消化20分钟左右效果就很好了，你如果消化1小时没有细胞的话，可以考虑胶原酶的浓度是不是过低，另外，消化前最好做预处理，将脐带剪成小块再消化，使酶液和试验品充分接触。

柏林小杨

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8 e1 O: ~( W5 P) H! F你的胶原酶的PH是多少啊？

gaorongbest

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0 x, A+ x! D0 n" d* [$ Z; ], Y& `4 B/ g4 w+ ~
我们用的是一型胶原酶，没用过二型的，是300个单位的浓度，应该不算低吧，我们是将血管什么的去掉后剪成小块消化的，两次了，都没有细胞。

gaorongbest

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+ m2 \) j$ x/ r' ^
- \. z6 |$ h6 n& x我们没测过胶原酶的pH，一般都是现配的胶原酶。

柏林小杨

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  z' I" n' y7 C+ S) K+ P# A+ G8 M9 g* [/ s' H
那你得找找细胞是怎么变没的了

zarecol

回复 gaorongbest 的帖子$ G. G( v% M+ n* V9 l

1 q2 c9 S0 A9 L5 h7 d没有细胞？我不知道你指的是什么，消化后肯定有细胞，即便你剪碎后不去消化，直接收集起来过滤离心后也是有细胞的，我想没有细胞的话，可能是因为你在消化之后没有充足的清洗，导致细胞悬液的密度过高，离心不足以使细胞沉降，你可以消化后多洗几次或者改用组织块法，希望能帮到你。