大家教我一下组织贴块法的秘诀吧？

mbpsky

上周我做皮肤组织贴块法。直接洗净剪碎至1mmx1mm，未消化，直接种在90mm培养皿中，间隔0.5cm。在培养箱孵育了1hour后补充加了4ml.当时已经贴住了。但五一假期之后发现部分组织块浮起来来，也未爬出细胞。高手指点迷经。

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我做过皮下脂肪的贴块法，物理剪碎至1mm*1mm的组织块，其实越小越好。我用小枪头吸取，贴在干净的培养皿底，再倒置于孵箱中，孵育2小时左右，基本贴得很牢固了。再加入培养基，切记小心，不要把刚贴上去的组织块冲下来，让后轻微晃动，再正置于孵箱中孵育一天，24小时后基本就有很多细胞爬出来了。视情况加培养基或者换液，拟或加一些三抗。

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组织培养的最简单的方法就是把组织块均匀的放置在培养瓶底，培养上5-10分钟，然后将培养瓶反过来培养上30-60分钟后在加培养液培养
. S( ^6 y' b2 F开始的时候可以加一半的培养液，然后换液勤快点并且换液的时候用倾斜轻轻吸走和加入培养液
7 a: ~. c: Z9 {% h9 `+ \等组织开始游离细胞并且完成贴覆后可以正常培养液量正常培养

biovictor

我觉得不铺胶的话，最好加培养基少一点儿，类似于悬滴培养，等到有细胞迁出后再添加培养基，这是关键！另外如果条件容许还是铺胶过夜最好。

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将组织块剪碎，越小越好，用移液管将组织块平铺培养瓶底，翻转倒扣培养箱中，第二天添加培养基并将培养瓶翻转过来，1周内不能碰触培养瓶

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采用倒扣法，将组织切成小块了，加入一点血清，不要先加培养基，翻转倒扣，在下面添加一点培养基，保证瓶内湿润作用。待一定时间后 ，在翻转过来，就好了

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组织块贴壁法，最好是培养瓶培养，过夜后加液，但是要在贴壁后倒置的瓶底加一些液体以防干燥

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估计贴壁的时间太短了，贴的不结实，建议延长到4-5个小时。

HMC

1 ?( |* r$ Z. T9 G* z$ k* Q( L, L4 D( u3 c4 c9 I! p! C
其实没有必要经常换液，可以根据液体代谢情况进行换液

mbpsky

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" H9 F* h3 \3 @5 Y5 ?2 d哦，这是个注意点。在时间上和其他细节方面有没有要强调的？比如多长时间加液啊，什么时候首次换液啊