MSC成骨诱导的培养基配制、诱导方法和染色方法

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我做成骨诱导分化的步骤，2 C! `$ _. t4 m- {5 g4 V  P
a) 成骨分化诱导培养基的配制! m$ p* \: Y2 S6 }& Y5 H: X
将胎牛血清及添加物加入基础培养基配制成骨分化诱导培养基，将配好的分化完全培养基过滤除菌，储存在4℃。8 Y+ y* B3 s; v; g: ]6 l
成骨分化诱导基础培养基                             175 mL
3 s' G, S; R* {: SFetal Bovine Serum（胎牛血清）                        20 mL
3 I8 }# ^5 C* w! {Penicillin-Streptomycin（青链霉素）                      2 mL8 r3 J2 A* ~* c! F# |- B- K
Glutamine（谷氨酰胺）                                 2 mL
; j* E# I1 m9 |" X* FAscorbate（抗坏血酸）                                400μL / E- l" X" \# m5 B7 ~
β-Glycerophosphate（β-甘油磷酸钠）                     2 mL6 X" B# A2 C: D
Dexamethasone（地塞米松）                            20μL3 H+ [# \9 e! e7 h! d
4 S, w6 D5 z# ?! {( R4 N3 C( V6 x
b)诱导分化
. x+ A# r; v' o9 K9 j$ a$ M2 ]1)取第3代细胞，接种于六孔板中。: S% y3 h- R- z7 p4 h( r. x
2)37℃，5% CO2 的培养箱中培养，两天换液一次。  
! h) N. ~6 c% e5 A2 A4 t0 ~' _3)当细胞达到50 ~ 70％汇合后，吸去培养液，加入2ml/孔成骨诱导液。 8 O$ U1 C4 d; b1 H( ]7 V
4)每隔 2-3 d换液新鲜的成骨分化完全培养基。 8 D: S+ T  y8 y0 m( L- n+ Q
5)分化诱导3 周后，固定细胞并用茜素红进行钙结节染色。
: g. Z' _+ j8 P  `. Y6 U- V: t) A: v/ @
c）茜素红染色 / y4 a) a8 w# E: |; O
1)去除诱导培养基，PBS 洗两次。加入4%多聚甲醛固定 30 min。 . L$ ^$ N7 s# L1 t
2)吸去固定液，PBS 洗两次。1ml/孔茜素红染 3-5 min。
7 D* o) Q5 v5 i* r2 f( ~3)去除染色液，PBS 洗两次。拍照。
9 G1 s( E% Q0 N/ S6 n8 O; B

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0 J: `; A# O4 J6 v+ N6 O! Y% `( |( {% O. k; W; t* P: ?
考虑确实严谨，但是我没有说我的血清是比例是10%，所以我总体积也没有说是200ml

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随后我把我做的图片上传