MSC成骨诱导的培养基配制、诱导方法和染色方法

aoppolle

我做成骨诱导分化的步骤，
1 ]1 y: R, T- I) Z+ P: Pa) 成骨分化诱导培养基的配制
  N4 ?+ F+ k5 R& a1 G将胎牛血清及添加物加入基础培养基配制成骨分化诱导培养基，将配好的分化完全培养基过滤除菌，储存在4℃。; c& r& c% _/ b$ w
成骨分化诱导基础培养基                             175 mL
. `+ l' m! x( w. E& n; s7 j5 |Fetal Bovine Serum（胎牛血清）                        20 mL % J7 P, _" j' e8 Z% F
Penicillin-Streptomycin（青链霉素）                      2 mL* n' ^7 p7 X" ~6 c
Glutamine（谷氨酰胺）                                 2 mL 2 B; k3 b, Y/ O2 O& Z, A
Ascorbate（抗坏血酸）                                400μL 3 G7 d. k, Q: E6 u4 a! K2 S& w
β-Glycerophosphate（β-甘油磷酸钠）                     2 mL% e; P9 ?# f" M5 s5 u
Dexamethasone（地塞米松）                            20μL
$ Y# i5 k$ w6 v; Y
7 Y9 @( i/ Z/ T! @8 U- O* d% y) b  ~b)诱导分化7 u( N# B9 q7 @8 \2 C
1)取第3代细胞，接种于六孔板中。$ ]( k$ V# P  L
2)37℃，5% CO2 的培养箱中培养，两天换液一次。  , j# O4 Z( v7 S; ]- _# N3 f
3)当细胞达到50 ~ 70％汇合后，吸去培养液，加入2ml/孔成骨诱导液。 9 v/ P' `- c2 p( }7 Z8 `& A4 x0 l
4)每隔 2-3 d换液新鲜的成骨分化完全培养基。 # p! o! H/ Y' p: M/ C6 h3 ^, `
5)分化诱导3 周后，固定细胞并用茜素红进行钙结节染色。
2 p6 F) G! u; ]9 g7 h! V5 s
  v! p& N6 ]$ ?6 J* A. X& kc）茜素红染色 * X$ s+ S+ h: b1 `
1)去除诱导培养基，PBS 洗两次。加入4%多聚甲醛固定 30 min。 : O/ M0 g: e" f  {8 L% M
2)吸去固定液，PBS 洗两次。1ml/孔茜素红染 3-5 min。
) E4 K4 _' f, A) `3)去除染色液，PBS 洗两次。拍照。+ ?' N9 v" O  X2 E  }4 y

luoziwei

能不能请你上传两张这个染色的图片让大家参考？这样大家就能有个模板

黑眼豆豆

不知道楼主茜素红染色结果如何啊！！！？

osterix

楼主写这些东西太笼统了，首先只写体积，没有浓度，那不是忽悠人吗？你算的时候，总体积怎么多了1.42ml，血清20ml，那么10%含量的应该200ml，175+20+2+2+0.4+2+0.02=201.42.科学讲究严禁。

aoppolle

回复 osterix 的帖子
# g2 v+ A4 V9 t+ h: L6 q' d0 v9 _  N" q: m# B
考虑确实严谨，但是我没有说我的血清是比例是10%，所以我总体积也没有说是200ml

aoppolle

随后我把我做的图片上传

nibirucome

有没有试过不加地塞米松的诱导培养基？

impingfan

楼主是买的试剂盒还是自己配的诱导液呢？

linchee

浓度呢？配制的话，给个浓度就好啦

clairezy1983

回复 aoppolle 的帖子4 j" [+ @& V2 d& n  M, `8 \9 L7 }

! }9 N! Y7 p6 x+ k我用茜素红染色的时候，是用95%的乙醇固定的，不知道有什么区别没有，我是采用本实验室前辈的方法，有的时候染色液会进入细胞内，我考虑是不是细胞膜破了。下次我也换成甲醛固定试试看。