iPS细胞的传代

ly200101042

我用的是胶原酶IV，室温消化5min后，吸走胶原酶，采用iPS细胞的培养液终止，洗一遍后，用枪头轻轻吹，吹下来的全都是MEF细胞，这个是为什么啊，我的iPS克隆还在板上呢啊，这个是怎么回事啊% Q1 x# J6 n9 s% z1 c! n9 W
我是新手，希望吧里的各位兄弟姐妹多多帮助！:handshake

ly200101042

SCNT 发表于 2011-5-15 08:58 1 X6 G$ k' k; @4 V7 i
用PBS洗涤了吗？

7 R  G/ J" m  q4 o- K/ b& ^6 c
洗了啊

ly200101042

christophe 发表于 2011-5-15 12:22
# g" K/ _5 ?+ N1 |因为ips已经形成克隆，细胞数较多，且克隆较为致密，室温五分钟有点短了，可以在37℃，延长些作用时间。血清 ...

! C/ D: P. C/ q# f+ ~呵呵 还行请教下您啊
6 _* C7 f5 c6 f1 E5 S那MEF细胞也一起下来了啊
( U3 @1 }, L+ ]2 b4 R: z% }: r为什么我觉得我iPS细胞比MEF贴壁牢呢啊

ly200101042

回复 ghfvcat 的帖子3 M8 `& ]6 ^" U) J0 G+ ~# }

: M; U  |, f/ ?) u/ q0 r2 J* c/ E为什么那么长时间啊
' y" k) v; }; [( D7 i您是说分原代还是已经培养若干代了吗

ly200101042

牙牙丫丫123 发表于 2011-5-15 17:50 2 b$ l  t4 O7 [' y' s7 P
一般0.1%胶原酶4都要消化2个小时左右的……

/ Q* P8 b6 t7 s2 Y我用的是1mg/ml 应该是1%的吧

ly200101042

回复 christophe 的帖子
2 y/ F+ L: o! G6 G+ ^! N/ h3 w/ m) l$ ]) @* N( r$ o
呵呵 好的啊 谢谢 楼上

ly200101042

ghfvcat 发表于 2011-5-16 09:20 3 I1 d8 z4 T( N$ m/ W% C
回复 ly200101042 的帖子  m, U) H: h, b; ]! q6 Y  P0 j
+ x2 Q/ Z9 z8 t
哪一代都是啊，原代的时候是挑的，没有用酶消化，传代的时候，大概都要消化上30- ...

' E) O) L- v; x& t3 f我消化5min确实消化不下来啊，我还得用枪头去刮，但我觉得我的操作太暴力了，细胞全都被我弄分化了啊。

ly200101042

genedu 发表于 2011-5-16 01:47 % t: w+ s  W) \0 ]0 i6 J" R
你用的那个浓度消化5min根本就不行，你最好设计个时间梯度，过五分钟看看，这样就能找到一个最好的时间点， ...

8 T9 W! [; w8 s7 g呵呵 谢谢 我再试下

ly200101042

st_oliver 发表于 2011-5-15 23:20
: H  T/ X* k2 Z6 u  y不同的iPS克隆，由于其重编程的程度不同，或者即使是完全重编程的，不同的物种，其iPS克隆的贴壁性也有很大 ...

" g! \* R! s2 x# A1 v' R* N
恩 学习了啊 谢谢