iPS细胞的传代

ly200101042

我用的是胶原酶IV，室温消化5min后，吸走胶原酶，采用iPS细胞的培养液终止，洗一遍后，用枪头轻轻吹，吹下来的全都是MEF细胞，这个是为什么啊，我的iPS克隆还在板上呢啊，这个是怎么回事啊  L; Y- d. s7 m$ Y6 E
我是新手，希望吧里的各位兄弟姐妹多多帮助！:handshake

gact

你已经诱导成功了？4 E  H( l) k" N3 `

SCNT

用PBS洗涤了吗？

christophe

因为ips已经形成克隆，细胞数较多，且克隆较为致密，室温五分钟有点短了，可以在37℃，延长些作用时间。血清不影响胶原酶IV的活性，无须终止，直接吸弃即可；
6 }) q6 S, ~5 r3 b5 S' l如果还是消化效果不好，可以再用0.15的胰酶（之前用PBS洗一下）消化1-2分钟，然后血清培养基终止反应，在用枪头吹打一下基本上就能分散开了。

ly200101042

SCNT 发表于 2011-5-15 08:58 - L. K7 O. H3 H1 w  Q6 Q# m
用PBS洗涤了吗？

7 j. t" K. ]% K, x. U! r洗了啊

ly200101042

christophe 发表于 2011-5-15 12:22 # P- l" d  F, K- o
因为ips已经形成克隆，细胞数较多，且克隆较为致密，室温五分钟有点短了，可以在37℃，延长些作用时间。血清 ...

0 K6 f+ y- u8 W8 z- C呵呵 还行请教下您啊
/ m9 p$ @% k5 H9 {5 i1 H2 q, ^# l  }那MEF细胞也一起下来了啊
, g$ D4 w2 y1 N. h9 N为什么我觉得我iPS细胞比MEF贴壁牢呢啊

ghfvcat

胶原酶IV，室温消化5min？
$ O; f( y( }& u, c1 u- U( ]7 Y6 H& h时间这么短就能消化下来啊，是小鼠的？好奇怪，消化人的时候一般都要消化上大半个小时的。

牙牙丫丫123

一般0.1%胶原酶4都要消化2个小时左右的……
7 d. x  _5 v, Y  ~. i( V8 O

ly200101042

回复 ghfvcat 的帖子) w, _: E1 f% N' ^8 M' q, @

8 O" ?; M9 `; S5 P% V* ^8 V' u/ e为什么那么长时间啊
" \6 r5 Q4 q( _' {2 W) f6 s# @# [您是说分原代还是已经培养若干代了吗

ly200101042

牙牙丫丫123 发表于 2011-5-15 17:50 , o2 x3 A, W! N8 n$ O
一般0.1%胶原酶4都要消化2个小时左右的……

1 m/ ]% y. j$ H7 J我用的是1mg/ml 应该是1%的吧