iPS细胞的传代

christophe

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9 C# K& n; w  Y# s
MEF铺展的比较开，而ips克隆较为致密，所以MEF应该比IPS较容易消化下来吧。; n; K1 E$ z; F
1mg/ml就是0.1%的，1mg/ml=100mg/100ml=0.1g/100ml=0.1%

ly200101042

回复 christophe 的帖子2 ?- Z* E0 X2 a( a2 p, U1 k
2 I$ W0 Z* q9 `  D2 }+ E
呵呵 好的啊 谢谢 楼上

st_oliver

不同的iPS克隆，由于其重编程的程度不同，或者即使是完全重编程的，不同的物种，其iPS克隆的贴壁性也有很大的差别，并不是笼统的多少分钟，需要根据你的诱导的细胞的情况来看，消化的经验，快的有5min，慢的有1个小时，甚至几个小时的。还有，胶原酶消化，不需要用血清培养液中和，你可以感觉有部分克隆飘起来的情况下，敲敲皿壁，只要大部分克隆下来就行了，有枪吹是最后的选择，一般多消化会，敲敲基本就行了。呵呵，最后祝你实验顺利噢！

genedu

你用的那个浓度消化5min根本就不行，你最好设计个时间梯度，过五分钟看看，这样就能找到一个最好的时间点，以后做实验的时候自己心里也就有底了

ghfvcat

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0 z! P1 e! i- g' ~! Q2 o) H0 h% ]$ E+ E
哪一代都是啊，原代的时候是挑的，没有用酶消化，传代的时候，大概都要消化上30-60min的，毕竟不是胰酶啊，小鼠的话，用胰酶消化，估计才不用五分钟，
0 y& y2 v8 i8 _8 ^( C. h我还不曾看见胶原酶五分钟就能消化下来的情况，额，难道是我买的胶原酶是伪劣产品？# G9 J, A6 O1 B
你再确认一下，胶原酶Ⅳ,1mg/ml，hiPS ？
6 X4 n7 X( \0 q3 E1mg/ml 应该是0.1%

前途似锦

我消化ES用 trypsin 有时集落先消化下来，feeder后消化下来

ly200101042

ghfvcat 发表于 2011-5-16 09:20 - `0 C, V9 ?/ y  t% z+ V3 G+ M
回复 ly200101042 的帖子/ x. J+ b; Y! a4 n- c" r

+ \  b1 ~- V* J2 I4 D9 L' z/ T哪一代都是啊，原代的时候是挑的，没有用酶消化，传代的时候，大概都要消化上30- ...

8 z9 y0 u* ^7 R( }
我消化5min确实消化不下来啊，我还得用枪头去刮，但我觉得我的操作太暴力了，细胞全都被我弄分化了啊。

ly200101042

genedu 发表于 2011-5-16 01:47
. w* g. q) M5 ?2 H" G( J; ^# N你用的那个浓度消化5min根本就不行，你最好设计个时间梯度，过五分钟看看，这样就能找到一个最好的时间点， ...

2 L; I# c6 V( \. {
呵呵 谢谢 我再试下

ly200101042

st_oliver 发表于 2011-5-15 23:20
" h4 }/ s7 m+ h% k. z, S# p不同的iPS克隆，由于其重编程的程度不同，或者即使是完全重编程的，不同的物种，其iPS克隆的贴壁性也有很大 ...

! s4 l9 C: m3 @' x& w+ c恩 学习了啊 谢谢

ygplay

christophe可以加我的qq 吗？希望得到指教。