iPS细胞的传代

ly200101042

我用的是胶原酶IV，室温消化5min后，吸走胶原酶，采用iPS细胞的培养液终止，洗一遍后，用枪头轻轻吹，吹下来的全都是MEF细胞，这个是为什么啊，我的iPS克隆还在板上呢啊，这个是怎么回事啊
0 g, n4 N' V0 D# n* B& L我是新手，希望吧里的各位兄弟姐妹多多帮助！:handshake

ly200101042

SCNT 发表于 2011-5-15 08:58
4 C: \! q" E" u! E2 a9 e用PBS洗涤了吗？

: R, D+ d' v( |3 ~- Q5 Q, @% y0 J洗了啊

ly200101042

christophe 发表于 2011-5-15 12:22
  v, E+ m3 h5 W) ~. K" M因为ips已经形成克隆，细胞数较多，且克隆较为致密，室温五分钟有点短了，可以在37℃，延长些作用时间。血清 ...

6 f  `8 {% F9 {0 h4 _9 _1 N  d
呵呵 还行请教下您啊% V4 G; P( L9 \4 f6 h
那MEF细胞也一起下来了啊
+ v1 o- L  i- W' H% p为什么我觉得我iPS细胞比MEF贴壁牢呢啊

ly200101042

回复 ghfvcat 的帖子6 w1 I) @! r0 @) b

0 N; _$ ^" `3 X1 Y为什么那么长时间啊 ) x" ^3 H9 Y/ q; k, S& G0 L
您是说分原代还是已经培养若干代了吗

ly200101042

牙牙丫丫123 发表于 2011-5-15 17:50
4 L; k: I* c0 }" u( T一般0.1%胶原酶4都要消化2个小时左右的……

( f9 R8 ]1 Z3 ?/ H- a. Z
我用的是1mg/ml 应该是1%的吧

ly200101042

回复 christophe 的帖子6 `7 z1 j/ Q: }3 K, u3 x
. i: ]9 \8 S( Y( ]
呵呵 好的啊 谢谢 楼上

ly200101042

ghfvcat 发表于 2011-5-16 09:20
  k3 D# G; _/ B8 S# g' f回复 ly200101042 的帖子7 N0 B- w& C  |8 G1 D
1 t7 F  L4 d6 ~+ U$ {6 ~
哪一代都是啊，原代的时候是挑的，没有用酶消化，传代的时候，大概都要消化上30- ...

5 C# c2 l' `/ q, [; b7 p
我消化5min确实消化不下来啊，我还得用枪头去刮，但我觉得我的操作太暴力了，细胞全都被我弄分化了啊。

ly200101042

genedu 发表于 2011-5-16 01:47
, R7 g* C% s/ L) _+ ^% ?' G你用的那个浓度消化5min根本就不行，你最好设计个时间梯度，过五分钟看看，这样就能找到一个最好的时间点， ...

( w# ?+ h! ^. ?' d& Q
呵呵 谢谢 我再试下

ly200101042

st_oliver 发表于 2011-5-15 23:20 ( P4 O7 B  X& D2 m: S7 b: o
不同的iPS克隆，由于其重编程的程度不同，或者即使是完全重编程的，不同的物种，其iPS克隆的贴壁性也有很大 ...

- q+ I) b# \( o* I% Y- e9 W& A  Z" N恩 学习了啊 谢谢