iPS细胞的传代

ly200101042

我用的是胶原酶IV，室温消化5min后，吸走胶原酶，采用iPS细胞的培养液终止，洗一遍后，用枪头轻轻吹，吹下来的全都是MEF细胞，这个是为什么啊，我的iPS克隆还在板上呢啊，这个是怎么回事啊
! J1 e% ^- X- {; p* T- A& a我是新手，希望吧里的各位兄弟姐妹多多帮助！:handshake

ly200101042

SCNT 发表于 2011-5-15 08:58 5 a6 w, A+ u. V
用PBS洗涤了吗？

1 @% Z# X4 _4 V, w0 A
洗了啊

ly200101042

christophe 发表于 2011-5-15 12:22 7 m  N$ O/ l9 n9 D6 {2 J
因为ips已经形成克隆，细胞数较多，且克隆较为致密，室温五分钟有点短了，可以在37℃，延长些作用时间。血清 ...

% d, J6 p4 ~9 u: y" c% k- ~
呵呵 还行请教下您啊. ~% _8 l3 ~. f' I* ~
那MEF细胞也一起下来了啊2 @* H. q/ A% P# T
为什么我觉得我iPS细胞比MEF贴壁牢呢啊

ly200101042

回复 ghfvcat 的帖子: M3 H3 ?. E. t. l- l( g4 X( [+ s
8 `) F; X! }/ `" r0 h
为什么那么长时间啊 2 T- Z" J4 J/ r6 H6 R/ b$ j
您是说分原代还是已经培养若干代了吗

ly200101042

牙牙丫丫123 发表于 2011-5-15 17:50 + p! i9 k- N! e8 B! U/ |
一般0.1%胶原酶4都要消化2个小时左右的……

! r4 n! D, b; M5 Z" ~. F- P/ o. J
我用的是1mg/ml 应该是1%的吧

ly200101042

回复 christophe 的帖子
% A/ ]4 Q( E  g  T: m5 J1 n3 a7 V
( z% f4 ]0 Z8 }) \( Y; Q呵呵 好的啊 谢谢 楼上

ly200101042

ghfvcat 发表于 2011-5-16 09:20
' v& t1 F6 K; O) [; a6 W6 d回复 ly200101042 的帖子
4 ^6 P4 h# x; L" M3 j4 Z0 W) ], I: E( `5 U
哪一代都是啊，原代的时候是挑的，没有用酶消化，传代的时候，大概都要消化上30- ...

4 M6 n1 Q1 @  q* ~我消化5min确实消化不下来啊，我还得用枪头去刮，但我觉得我的操作太暴力了，细胞全都被我弄分化了啊。

ly200101042

genedu 发表于 2011-5-16 01:47 - b$ b  m# ^3 g6 S$ U" L
你用的那个浓度消化5min根本就不行，你最好设计个时间梯度，过五分钟看看，这样就能找到一个最好的时间点， ...

$ V+ I6 ^2 _% `, [
呵呵 谢谢 我再试下

ly200101042

st_oliver 发表于 2011-5-15 23:20 $ K# {) I6 r$ _0 Q- S
不同的iPS克隆，由于其重编程的程度不同，或者即使是完全重编程的，不同的物种，其iPS克隆的贴壁性也有很大 ...

8 C# e& ]( U5 w, m( L1 l# |
恩 学习了啊 谢谢