请教悬滴培养的拟胚体培养方法

wxiouno4

包括培养三天后换液还是直接悬浮培养，本人初养拟胚体

zpzp0312

每毫升1百万的密度在培养皿盖子上
6 z, q# e4 k# y7 B' B3天后直接就可以悬浮培养了6 U5 i+ e: ?; Y1 D
悬浮2-4天就可以贴壁培养了

痞子的烟头

直接悬浮培养就可以了！没啥技术含量

wxiouno4

回复 zpzp0312 的帖子
$ L/ U0 c  I& P- C! W7 u+ j- m$ s! f; K7 e( I
兄台，我做的是20ul600个细胞。。你确定这个密度不会高了

nihaohao

+ Z. Q# ^# ~! n- m
2 v8 L* }  W' z% v" C0 N0 V& P9 ~4 f
zpzp0312 你好，: S( Q7 H5 O9 k5 w/ N3 b
你所说的每毫升1百万的密度在培养皿盖子上，3天后直接就可以悬浮培养了。
$ n  b: P9 D, {  z1 r, q8 F
8 m( C6 ^2 w$ A! \) {: |接种多大量呢（多少微升？）？ 接种后3天然后把培养皿的盖子盖在培养皿上即可？' [/ Q3 f) q- c! b7 E0 S3 z: M% A

9 M% U9 ?, n/ _3 y* u+ \7 f1 D6 }" s; W1 z5 i% {, Z
我没有做过，不懂，以后要用到，特此请教。5 b( @/ P- E- R# r: z
! t! Y4 h- G1 }  M0 ]0 G  E

- J, G9 e6 [* W" Q) ?8 L; ^

细胞海洋

回复 nihaohao 的帖子+ g) x5 @1 R- ?# e2 H0 |# Y
0 o- `: i. n! ?  W3 M
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cony

20ul 每个液滴，大约500-1000个细胞，悬2天，后悬浮培养5天。

czzhaozhu

一般对小鼠ES细胞分化采用悬滴法的多，我个人经验是300-500 cells/30ul/滴，悬浮在皿盖上，2天后轻轻地吸下来，在petri皿中继续悬浮培养。

sheepthief

1、我看有protocol中要求一定要bacterial petri dish,不要使用tissue culture dish,认为前者可以有效的悬浮，而后者容易导致贴壁，是这样吗？确实有这种必要吗？$ g1 s  B* j- d" n8 F
2、如果是必要的话，这种bacterial petri dish在哪里买呢？

czzhaozhu

悬浮培养EB时一定要使用细菌皿，使之不贴壁，德国Greiner的效果比较好，好多生物公司都代理，我们用的是北京鼎国代理的。