求助大鼠BMSC原代培养问题

759512199

各位大侠，大鼠BMSC的原代培养会产生克隆样的生长，大家是继续养还是传代啊？继续养会不会长老了，传代会不会太稀了？

babyzeng

BMSC本身就是克隆样生长的啊，骨髓中MSCs占有的比例是十万分之一左右。按10的七次方的细胞密度种植也就百来个细胞，最后都是一个一个克隆增殖出来的啊。

759512199

回复 babyzeng 的帖子5 u6 t  ^  d+ ^" D
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那你是一直培养直到长满整个瓶，还是一星期左右传代？

babyzeng

不要等到长满，大约50~60%就该传代了。

ljj0558

建议不要长满，克隆中间细胞稍密集就可以传代了，我习惯是这样" w' A" ]! ~% L2 ^6 [

taxuewuge

我们实验室老师要求长到85%才传代，建议传代时不要用离心法，那样对细胞伤害太大，导致传代后细胞生长慢。我已经吃过亏了。

骨道边

回复 taxuewuge 的帖子
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不用离心法那应该用什么方法呢，因为我估计过两天细胞长出来也要传代了，急求！谢谢了

taxuewuge

倒掉培养基，用D-Hank's洗三遍，加3ml胰酶，待细胞80%变圆后，加5ml培养基将变圆的细胞吹打下来，然后分装成两瓶，第二天全换液

骨道边

好的，今天看了一下细胞，还是没有长成一片啊，都是小范围的发展，好像各自为政似的。心里很是着急啊，我这两天换液的时候都是用pbs一直冲它，希望把瓶底的杂质吹干净可效果还是不怎么的。不知道什么时候能长成气候，别等到细胞都衰老了都不能传代。自我认为还是第一次半量换液的时间有点长了，搞得那些不是干细胞的杂细胞也给贴壁了现在就很难冲下来了

iceyang

80%融合即可传代