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[讨论] oct4启动子在(胎儿)成纤维中是否有活性 [复制链接]

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包包
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楼主
发表于 2011-5-20 21:35 |只看该作者 |正序浏览 |打印
大家好,如题,我在用荧光素酶检测oct4的启动子活性时发现,胎儿成纤维细胞中相对于对照pGL2-basic有2-4倍的活性(不同长度片段的活性类似),而在干细胞中则是几十倍的活性(不同长度片段的活性差异很大),多次重复实验都是这样。请问我该如何解释Oct4在成纤维细胞中的2-4倍的活性呢?因为,理论上讲,成纤维细胞是不表达Oct4的,但却有2-4倍的荧光素酶活性,很困惑,请高手指点。如果有相应的参考文献最好,谢谢。* Z! U. u3 g+ z: F
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报纸
发表于 2011-5-21 09:04 |只看该作者
回复 好玩301 的帖子
+ W1 M' n: U% O& v& B0 ]
, @: }. q: \# B' x" D) q我觉得你要是看Oct4在成纤维细胞里表不表大应该是和胚胎干细胞里比,结果才有效吧?
. g/ |# E$ m6 J4 J9 V我师姐说luciferase的报告系统不是很稳定,我没有用过,不知道和这个有没有关。
3 n; v/ h  B/ x还有就是你导入之后什么时候观察荧光的呢?我觉得可能Oct4启动子在成纤维细胞中被沉默,如甲基化需要一段时间吧。8 L" T: ^, e; O  ]5 f# X6 |7 i

! }0 P' {+ {# \& Z& g! O1 u- i  ~
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板凳
发表于 2011-5-21 07:39 |只看该作者
请问jun8013 ,如果假基因存在,就有2-4倍的活性吗?有没有相应的参考文献啊,谢谢
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藤椅
发表于 2011-5-21 06:56 |只看该作者
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Oct4在胎儿成纤维细胞中不表达。pGL2-basic含SV40启动子部分上游序列,如替换其中的SV40启动子为Nanog、Fbx15等启动子,再进行Luciferase分析,可能就不会有2-4倍的问题。与pGL2-basic对照比,增加2-4倍,也不能算阳性。
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沙发
发表于 2011-5-20 22:40 |只看该作者
也许是假基因,也许就是表达
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