世界首例可发红黄绿青四种荧光的克隆猪（附原文）

大猪小猪落玉盘

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中科院广州生物医药与健康研究院成功培育出一种特殊的转基因克隆猪，这种克隆猪在特定波长的激发光下可分别发出红、黄、绿、青4种荧光，这是国际上首次获得能够同时表达四种荧光蛋白的转基因克隆猪。
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该成果是广州生物院在赖良学博士的领导下，与南方医科大学顾为望教授以及华南农业大学吴珍芳教授合作共同完成的。研究组通过电穿孔的方法将编码红色荧光蛋白、黄色荧光蛋白、绿色荧光蛋白以及青色荧光蛋白的四种基因同时转入长白猪胎儿成纤维细胞，然后用表达四种荧光蛋白的细胞进行体细胞克隆，将克隆胚胎移入的代孕母猪体内，最终获得11头转基因克隆猪。目前，8头转基因克隆猪已健康成长一年多，并开始繁殖下一代。/ s  {& |6 b; A4 \& z

' D! w: u' O# z0 j1 l, T8 Q目前，体细胞克隆技术是生产转基因大动物最有效的途径，但受体细胞增殖能力有限的影响，在此之前的研究中，每一轮克隆只能转入一个外源基因。赖良学博士领导的课题组经过潜心研究，利用2A短肽序列巧妙地将不同的荧光蛋白基因连在同一个载体上，从而只通过一轮动物克隆即成功获得了含多个外源转基因的克隆猪，不仅克服了体细胞多基因转移的技术障碍，而且实现了多基因在高水平上的协同表达。/ a- \) U) `' b, k
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众所周知，猪是人类组织、细胞和器官异种移植最有前途的供体，克隆猪表达的荧光蛋白为追踪猪组织、细胞和器官在受者体内存活和机能状况提供了重要的标识，因此，就表达四种应光蛋白的克隆猪本身而言，它将成为异种移植研发的理想动物模型。
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该项研究成果的取得，标志着我国转基因克隆猪技术达到了国际领先水平。该项成果的运用，将极大地促进含多种优良性状的转基因克隆猪的研究与产业化，为今后加速我国对猪的遗传性状进行转基因改良，提高其生产性能，并制作用于人类疾病动物模型以及作为人类器官移植供体的的转基因猪研究奠定了基础。3 E3 s1 f; J$ T9 Q: P
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相关论文于5月13日发表于国际期刊PLoS ONE（6(5): e19986. doi:10.1371/journal.pone.0019986）上。$ w$ c1 x9 t3 D+ a: G
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) @2 K/ P- |5 w7 M5 O; Z( \* L7 B) s- w5 I; C& u
可发四种荧光的克隆猪
2 Y% I1 v$ z. n6 r9 }; T! Y- K$ ]2 Z( w6 ^" W' c, ~

- y8 a4 N& k5 X7 o- b4 C  S
; P& G5 ^/ @+ ~- d7 ?: N四种颜色的荧光蛋白以及合并后的蛋白0 w$ @- d% `! j% d
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8楼原文 感谢zyyzyy1985 提供

xuexi

Abstract1 ^* F& [; k& E
Multiple genetic modifications in pigs can essentially benefit research on agriculture, human disease and xenotransplantation.
/ n2 U' m# K; X' @Most multi-transgenic pigs have been produced by complex and time-consuming breeding programs using multiple
/ v5 g8 @  D$ k/ Vsingle-transgenic pigs. This study explored the feasibility of producing multi-transgenic pigs using the viral 2A peptide in
8 V5 I, Q4 |  n" wthe light of previous research indicating that it can be utilized for multi-gene transfer in gene therapy and somatic cell' b  N# c, S5 f" Q0 b0 _
reprogramming. A 2A peptide-based double-promoter expression vector that mediated the expression of four fluorescent
3 v# q7 V( ~; S9 E" T" ?8 I/ |! rproteins was constructed and transfected into primary porcine fetal fibroblasts. Cell colonies (54.3%) formed under G4189 ^, R; R8 j. s+ e7 x* z0 B2 ]
selection co-expressed the four fluorescent proteins at uniformly high levels. The reconstructed embryos, which were
! v4 f( r, G) q6 w% \8 l/ r7 [obtained by somatic cell nuclear transfer and confirmed to express the four fluorescent proteins evenly, were transplanted7 X! C1 V" t2 K: M$ m: Z
into seven recipient gilts. Eleven piglets were delivered by two gilts, and seven of them co-expressed the four fluorescent
  X! S6 o" c( Q$ ?0 Vproteins at equivalently high levels in various tissues. The fluorescence intensities were directly observed at the nose, hoof
: W$ g1 y5 h( V. v+ Z, Dand tongue using goggles. The results suggest that the strategy of combining the 2A peptide and double promoters: m* d/ a+ a; E! o' B! h
efficiently mediates the co-expression of the four fluorescent proteins in pigs and is hence a promising methodology to0 t* U# q' I, ~' x4 y+ ]
generate multi-transgenic pigs by a single nuclear transfer.

xiaomingxu

恭喜赖老师实验室！

hormone008

猪，或与之类似的大动物的转基因，一直是一个难攻克的技术难题！* b4 D: F% n' e: \
而作为一个大动物的试验应用价值更是无法取代的！
$ a0 t" ~& z: ^4 E4 C在全美国，也只有三家公司（实验室）能够做转基因猪。这是我的领导告诉我的。（她美国八年，刚刚回国，MD aderson）

hormone008

这样看来我们国家的技术也在突飞猛进) G- Y- Z" y3 ~/ e0 Z4 T1 \
可惜可贺: s& H/ C" z! q$ }/ A
希望不要作假@

zyyzyy1985

很是不错，值得参考学习，不过最近感觉对 猪肉的印象不是很好。

zyyzyy1985

楼主，能不能提供这篇paper的全文呀？谢谢

zyyzyy1985

刚刚搜到的全文，方便大家阅读和学习

he_liang

学习了！

xiangchou812

我看了全文，发现里面并没有检测2A有没有起作用。试想，如果2A连接的两个蛋白是融合蛋白的话，也可能会发光。比如，pEGFP-C1系列载体，这说明，与其他蛋白相融合时EGFP也会起作用，也就是说这篇文献里的2A不一定起作用。