流式检测干细胞分离效果

xjhou17011

最近想检测一下实验室分的干细胞纯度，用流式，检测CD34和CD105有亲做过给个protocol吧，还有大概抗体要多少钱啊。

xiaogao

没有做过流式分选，帮顶！
  e6 [% D+ e. B( \ps：听说流式会对干细胞有影响，不知道是不是这样的？？有什么样的影响？？

xjhou17011

哎没有我想要的答案啊

jhu132llh

一抗大约是2000-4000
% k1 i, J8 I) Y. h二抗就用国产的吧
  Z( s' u7 @: z9 \效果也很好的
5 S9 {- t2 N, R" g# u" P7 Y/ ^1 @大约5、600的样子
, G: v3 n$ \  N) ~  I& R! f不贵的
5 j7 ^) Y. a( b# v& A9 B+ J3 o! J  C5 f9 C4 w( G
流式分选的话书上的方法已经很成熟了' R. n5 d/ M* D
好好看看书就可以的了. D( q9 K5 q6 a: z# X
无外乎就是几步：" n& z  _9 N$ J2 I+ {. o
1.收集细胞, v2 F/ d9 J/ P: i
2.洗去血清成分( g) L& ^2 u0 N4 W9 d& N
3.一抗孵育，洗涤; G* k) {" k5 k8 K/ g, q/ q  U
4.二抗孵育，洗涤
) U. Z2 Y5 I8 w* S( Z, S: O' f! r* u5.第二个抗体的一抗孵育，洗涤
' M+ d4 j! J3 T* s9 N6 C- R# a+ K6.第二个抗体的二抗孵育，洗涤（如果不发生免疫反应的话，2个抗体的一抗二抗可以混在一块加上，节约时间而且减少细胞的损失）7 s9 M! @9 J- o: K. L- E
7.上机检测分选
3 m. e& B, Q/ L& j8.结果分析

xjhou17011

我查到BD有个kit,是直接可以检测的，里面还有个control，不知道是怎么用的。好像可以直标的，不用2抗了。# ?9 N) R; ^. c6 B8 `( R$ O
- H+ J3 V; {& v; W4 X) A" t! }; A
so6 }, r6 U; S$ E" C
骨髓中单个核细胞分离后取106和CD34抗体孵育30min，PBS洗涤，上机检测1 O; S4 g& E# [
对照：用PBS么？& i7 C3 K1 [, j/ c
另外：分离前的细胞中CD34细胞怎么检测啊？好确定分离的效率。" i/ w( _" Y+ c7 q
要不要裂解红细胞？怎么算呢？
7 c- M+ R: E' K( ~8 T2 M; ?; P, B1 N/ e0 B. I' P