原代肿瘤干细胞培养的几个初级问题

doundo

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" `# ~1 J1 d8 P1 a" k8 }1 a 请教几个问题：, H% q# d/ z" |1 _* D
1、在在文献上看到, the spheres were mechanically dissociated into single cells and diluted into culture medium. The suspended cells were seeded into 96-well plates with the dilution that would result in one cell per well. The single–cell-containing wells were identified by checking the culture wells 2 h after the cell-seeding process. 请问如何确定稀释的浓度以保证one cell per well？具体怎么操作？6 n- F, t& e, }& e% h" q" p
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2、冻存的肿瘤组织 还能否取干细胞？一般需要多大的组织块？! B$ r9 X) A# n" R8 r9 {/ u
3、良性肿瘤是否也可培养出瘤？
! G9 l) h" v1 W! s1 H8 V3 S/ S/ A7 `* }9 N" |+ I) O* Y
4、我一个操作手册上看到这样的步骤：4 a5 J/ z/ U; ^0 v4 L1 S! ~+ {
     a The digested tissue was resuspended in 10 ml of PBS 1× and triturated by passing it in a tissue sieve (0.38 mm, 40 mesh) and recovering the cells in a 100-mm dish.6 ^" D9 X& ?; ^9 R) Q0 i; E
    b. The recovered cells were then passed through a 70- mm cell strainer (BD Biosciences) and collected in a 50-ml centrifuge tube.
  V& o6 J+ e& j' H: k+ m请问其中的tissue sieve与cell strainer分别是指什么？试剂商说他们只有那种200目得细胞滤网.请问大家有用过这两个东西的在哪里订购？

doundo

自己顶一下 ，更正问题3 、良性肿瘤是否也可分离出干细胞球？

hormone008

好问题
" `: ^5 T7 W$ _/ s0 c7 p2 `* F静待高手解答

guosapphire

1.one cell per well:你需要先将细胞计数，然后稀释到需要的浓度，这和你每孔加的培养基的体积有关系，比如你每孔加100ul，那么就将你的细胞悬液稀释到 1个/100ul的浓度。
6 U' w' w& {) }- }# s2.冻存分好多种，如-20，-80，液氮，请具体说明。虽然没有试过，单个人认为冻存过的很难。
* H3 q* {9 `5 n2 k( c4.tissure sieve 和cell strainer基本一样，你买400目的细胞滤网也可以用。
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doundo

) g; t1 ]2 J) O! d1 M& h; }
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回复 guosapphire 的帖子
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# P7 Q0 V4 g; a感谢guosapphire：
/ _  |* Z1 x  ^① 是-70度
- E- F( n, O! c+ v②tissure sieve 和cell strainer的目的均是滤去组织碎片吗？在上边两个连续的步骤中，是否均可以400目得滤网代替？

guosapphire

-70保存的我认为不能再用来分离培养细胞了。* N: i7 L- D8 B' g7 @. m2 \
是为了祛除组织碎片的，你们做肿瘤的我认为可以使用400目的滤网。

xiaogao

  肿瘤组织里面有多少是干细胞？？？原代能分离出来多少啊？？怎么鉴定啊？？