原代肿瘤干细胞培养的几个初级问题

doundo

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8 ?) p# S) w$ {$ {7 g3 t
请教几个问题：
5 A$ `/ m7 S# h9 f5 g$ X# Y1、在在文献上看到, the spheres were mechanically dissociated into single cells and diluted into culture medium. The suspended cells were seeded into 96-well plates with the dilution that would result in one cell per well. The single–cell-containing wells were identified by checking the culture wells 2 h after the cell-seeding process. 请问如何确定稀释的浓度以保证one cell per well？具体怎么操作？. k8 u: P9 u" z3 s; `

& u! x1 f. }1 y% ]9 R3 G2、冻存的肿瘤组织 还能否取干细胞？一般需要多大的组织块？5 f  t0 e4 \% k- Y" d: s  B  R% P
3、良性肿瘤是否也可培养出瘤？* c, u- \% K! A4 Q) S3 x
( X7 ?* T" j/ _. o
4、我一个操作手册上看到这样的步骤：5 b' E3 X9 a: S& |. X$ k) m$ X, E4 w
     a The digested tissue was resuspended in 10 ml of PBS 1× and triturated by passing it in a tissue sieve (0.38 mm, 40 mesh) and recovering the cells in a 100-mm dish.! A( _  {4 r; @5 m
    b. The recovered cells were then passed through a 70- mm cell strainer (BD Biosciences) and collected in a 50-ml centrifuge tube.! j' S  z) W: x: y  H( q% j
请问其中的tissue sieve与cell strainer分别是指什么？试剂商说他们只有那种200目得细胞滤网.请问大家有用过这两个东西的在哪里订购？

doundo

自己顶一下 ，更正问题3 、良性肿瘤是否也可分离出干细胞球？

hormone008

好问题; f, ~$ M% J1 B! B
静待高手解答

guosapphire

1.one cell per well:你需要先将细胞计数，然后稀释到需要的浓度，这和你每孔加的培养基的体积有关系，比如你每孔加100ul，那么就将你的细胞悬液稀释到 1个/100ul的浓度。1 g4 \/ h+ A- A4 J1 b2 R
2.冻存分好多种，如-20，-80，液氮，请具体说明。虽然没有试过，单个人认为冻存过的很难。# D3 }" b/ }4 \4 L% ]
4.tissure sieve 和cell strainer基本一样，你买400目的细胞滤网也可以用。" m, m& Z* \/ J2 k, S! T2 s' h

doundo

4 |" _! c6 M7 P( j

# }2 c% u) z. _& t回复 guosapphire 的帖子( ~; Z* O8 g. D) o  \- W
( ^" Q9 P, o* y
感谢guosapphire：1 u; J  X6 ~' p7 @
① 是-70度- F5 H( ?. U' `2 K
②tissure sieve 和cell strainer的目的均是滤去组织碎片吗？在上边两个连续的步骤中，是否均可以400目得滤网代替？

guosapphire

-70保存的我认为不能再用来分离培养细胞了。4 p$ t9 L/ H' }% P. X; ?7 e
是为了祛除组织碎片的，你们做肿瘤的我认为可以使用400目的滤网。

xiaogao

  肿瘤组织里面有多少是干细胞？？？原代能分离出来多少啊？？怎么鉴定啊？？