参加2011年6月3日同济大学干细胞技术临床转化应用讲座的一点体会：

scienese

20110604
; F1 f( G1 T" Y金颖老师讲课总结
& @3 t* i- ]/ T" R2 AStem cell 定义：self-renew 、differenation/ p9 E, d5 K2 \4 Y3 F1 r
八细胞之前叫全能干细胞（totipotent），之囊胚叫亚全能干细胞（pluripotent），再往下叫多能干细胞（multipotent）如造血干细胞和单能干细胞（unipotent）如皮肤干细胞。
1 \7 A. R& y6 e( {' q+ Y, H% _# E
4 E) L: ?& O& ^& d! O) K在胚胎着床以前叫胚胎干细胞（embryonic stem cell）在着床以后叫epiblast。
' u0 _$ C% I# U5 s" w) j
- L( _6 {+ E' h/ G" I3 [分离胚胎干细胞有两种方法：免疫外科法，机械法  机械法难度高耗时耗力但金颖老师实验室使用此方法，免疫外科法 要掌握好补体配体的浓度以及作用时间. |8 \7 a% K: }# s0 K5 D
* b$ ?  M: M- t% p
分离胚胎干细胞最重要的一条是要找到优质的胚胎，周围滋养层细胞呈半月形时最好，将内细胞团剥离后放置于滋养层上7-9天后看有没有clone长起来，如果没有可以延长观察时间至两周，把内细胞团放置于饲养层上前两至三天不能看（place ICM on to feeder layer）防止内细胞团漂浮或与feeder 贴不紧。
& ~( L. h  D  L. ~- |8 i" t, _! _
维持胚胎干细胞多能性的三大关键因素：a饲养层细胞，饲养层细胞密度很重要 有的胚胎干细胞系喜欢密的有的则喜欢较稀的    b  bFGF 最佳浓度为4-8mg/ml   c传代 胶原酶 胰酶 机械法 金老师提倡用机械法 因为胰酶处理后对细胞伤害特别大 很容易就分化 胶原酶也不提倡 金老师实验室的学生传一个6cm 需要两个30min 特别辛苦2 N) F" B9 G# E# X
# N, U$ l4 F3 M0 c
细胞分化研究包括三个方面:1,形成拟胚体（EB）拟胚体内就有三胚层细胞  2，co-culture with other      3，monolayer culture with defined medium. ~6 m0 M/ X* l* R. c% ]

. B% c1 U' N: Y! o鉴定胚胎干细胞工作
# I7 t2 v+ \5 f核型正常 % l* c4 b8 Y3 I' ]  a
能传超过70代次/ Z- ?/ K% h$ I, g* N; d. c
能冻存和解冻  人胚胎干细胞不能消化成单个细胞保存 单个细胞特别容易死 每解冻一次都像从新分离一次3 K/ x2 N" Y( }5 S3 {
自我更新
6 {. B, Q& k: t1 C3 U- x: B表面标记检测，包括 Real-time、免疫荧光、基因表达谱分析' y! G0 g+ K# G7 {2 m: \  o
端粒酶活性' Z$ h  a0 U7 @# o/ Y
畸胎瘤$ d1 l! e: R/ W, W1 c) k# D! V
嵌合体动物
$ r  x# v# _( p8 {9 j, ~  d1 W2 @" w6 d5 Q7 ]9 A* H+ C
康九红老师主要讲了Chip技术 利用转录因子chip-seq和核小体分辨率chip-seq 一般能将发挥某一功能的转录因子缩小至3-5个转录因子
5 ]: W( t6 `2 r& _5 K7 P! s$ [7 S. K0 J3 N$ ~3 L
还讲到甲基转移酶 不同的甲基转移酶参与不同的甲基化反应  有的甲基化有利于胚胎干细胞分化，有些甲基化则能使成体细胞重编程
# c! J  n! c7 n2 v( s$ p& \  A6 v: w; T$ @
下午6 f& O) `6 O: C. }9 e
7 m' d9 m4 Z5 ]2 z
周琪老师讲干细胞的多能性和安全性  F, k7 V3 Q. ]) ?/ M
周琪研究组还在尝试做猪的胚胎干细胞0 p9 P# D0 R! d" C

+ N: ^$ b! M8 |! Y        Oct-4        SSEA-1        SSEA-3        SSEA-4        TRA-1-40        TRA-1-81- u# O8 q( e6 F$ a: i
Mouse
% @4 s# I* S' S* C( VESCs         +        +        —        —        —        —6 S2 ~+ k0 j$ F+ ?
Rabbit: ]4 X/ W3 |; n8 Y8 K! H! A3 N0 O2 |4 b% X
  ESCs        +        +        +        +        +        +  e" D; _5 W0 Y& D+ S6 Q
Monkey
4 C, l# ~- Z& T- m! d7 s   ESCs        +        —        +        +        +        +& m1 `! G4 X) V
Human
  z  B- a4 k, s3 ?$ z+ @4 `- |  ESCs        +        —        +        +        +        +( G! @# |; x4 p3 ~

( W3 ~7 u" R% A% }7 s& Z. o) T
, G2 W- G* P. Z; q7 w赵春华老师5 s7 e/ w9 ^  Z- }; H6 j: p

* L) W' B  ^% m- E8 W( @3 iDKK 抑制wnt 通路beta-actin  是通过激活nanog 来对beta-actin发挥作用 已发表 可查
# a5 W/ e5 Z/ P# S