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[请教] 如何收集三维支架上的细胞 [复制链接]

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包包
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楼主
发表于 2011-6-9 16:08 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
最近在培养MC3T3-E1细胞,并将其接种与三维的支架上,检测碱性磷酸酶的活性。遇到一个问题,就是如何收集支架上的细胞获得细胞上清液。
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沙发
发表于 2011-6-9 23:33 |只看该作者
不能用酶消化吗???
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藤椅
发表于 2011-6-16 14:57 |只看该作者
回复 云云逍遥 的帖子# w8 P3 M4 x' n3 v+ W
3 ^! F+ X4 k& d  k# b& f
建议还是直接做染色得了,定量的准确度也不够高
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板凳
发表于 2011-6-16 15:25 |只看该作者
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回复 云云逍遥 的帖子: C$ X; h7 @" Y) l

+ Y5 I& v' u: W  y- ^  W为什么要收集细胞呢?
  E7 b7 c. \& W+ }3 q$ p. i; a! W你直接加蛋白裂解液提取材料与细胞复合物总蛋白,然后去检测就可以了啊
  H6 P( ?4 x  e& W. O4 h* B0 S主要是看你的支架是什么性质4 f* I% [. ?7 F
可能需要研磨、超声等
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报纸
发表于 2011-8-27 20:54 |只看该作者
回复 jiojoo 的帖子. J  N  F3 ?$ T/ d4 }8 J; c2 Y2 v
' X" O: M! h( M. Q+ Z5 S. U2 Y
我的支架是明胶做的三维多孔支架,我主要是测细胞在这样支架上的碱性磷酸酶的活性。我看文献都是需要把细胞裂解,取细胞上清液去测,但是怎样将细胞裂解呢?
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地板
发表于 2011-8-29 08:51 |只看该作者
根据支架材料的不同,采取不同的消化方法就可以收集细胞了啊,直接消化裂解下来接着做就下边的工作了啊。
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优秀会员 金话筒

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发表于 2011-8-29 08:55 |只看该作者
碱性磷酸酶也可以用上清来检测呀,如果一定要用细胞的,看你的支架材料性质了。如果可以用胰酶消化,那就先消化下来,在裂解可能会裂解的更充分。如果不行,那就直接加蛋白裂解裂解吧。
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