如何收集三维支架上的细胞

云云逍遥

最近在培养MC3T3-E1细胞，并将其接种与三维的支架上，检测碱性磷酸酶的活性。遇到一个问题，就是如何收集支架上的细胞获得细胞上清液。

aulenuyah

不能用酶消化吗？？？

realinter

回复 云云逍遥 的帖子7 I) {& B0 m8 I
# c5 j+ ~% Y  ^6 M; C
建议还是直接做染色得了，定量的准确度也不够高

jiojoo

回复 云云逍遥 的帖子9 a1 C9 D5 o0 y) X+ a* @- }* T! p: v; R6 s
, D3 I' J& a5 ~6 \) W/ ]" ~
为什么要收集细胞呢？
) g1 L# A, F* g9 G/ D, }5 R你直接加蛋白裂解液提取材料与细胞复合物总蛋白，然后去检测就可以了啊
( q7 d: |/ o7 }0 l3 L: F主要是看你的支架是什么性质3 E. |3 F" r8 }1 r- y. ^
可能需要研磨、超声等

云云逍遥

回复 jiojoo 的帖子. T$ H1 j/ e: U+ b

" J' J& h: B5 i6 R3 X我的支架是明胶做的三维多孔支架，我主要是测细胞在这样支架上的碱性磷酸酶的活性。我看文献都是需要把细胞裂解，取细胞上清液去测，但是怎样将细胞裂解呢？

rain2402

根据支架材料的不同，采取不同的消化方法就可以收集细胞了啊，直接消化裂解下来接着做就下边的工作了啊。

osterix

碱性磷酸酶也可以用上清来检测呀，如果一定要用细胞的，看你的支架材料性质了。如果可以用胰酶消化，那就先消化下来，在裂解可能会裂解的更充分。如果不行，那就直接加蛋白裂解裂解吧。