如何浓缩慢病毒？

sizhengliu

我要做慢病毒转染，现在想自己来浓缩慢病毒，看了一些资料，发现病毒浓度不高，浓缩是一个关键问题。我在的实验室有4度离心机，目前我还没有买任何试剂。请有经验的朋友路过指教，我怎样比较有效率的浓缩慢病毒？还需要什么东西呢？不胜感激！！

daviddow

超速离心，大约32000rpm，3个小时

sizhengliu

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5 v8 j2 j8 x, J9 u4 E6 |8 \2 ^6 K* N7 B+ d
谢谢！用你的方法，你能得到的滴度一般是多少呢？

huangcong1988

  病毒的收获及浓缩
6 w& ?( G: M& r; C+ |; \5 I0 V（1)收集转染后48h（转染即可为0h计起）的293T细胞上清液。' J& c! K- H8 f# W/ p+ K
（2)于4℃，4000g离心10 min，除去细胞碎片。
/ o& u3 v5 o( v/ T# \2 q（3)以0.45μm滤器过滤上清液于40ml超速离心管中。9 N6 A% _  |$ \- f' X) X
（4)把病毒粗提液样品加入到过滤杯中（最多19 ml），盖上盖子。将过滤杯插  K! t6 h, O- v$ f) f& t& d
到滤过液收集管中。
0 u  C! a- n1 v3 [( o（5)组合好后，做好平衡，放在转头上。  g+ r- L( D6 n
（6)在4000g离心，至需要的病毒浓缩体积。通常需要的时间为10-15min。
; f+ N5 Z' F3 k+ c, L7 n( H（7)离心结束后，取出离心装置，将过滤杯和下面的滤过液收集杯分开。  W# H& r* B: K
（8)将过滤杯倒扣在样品收集杯上。7 m% [2 g, J! L# o2 \
（9)离心力不超过1000g,时间为2min。过高转速会导致样品损失。把离心杯从
( H5 p9 ~; m$ f$ \样品收集杯上移开。样品收集杯中的即为病毒浓缩液。# `4 M1 Z3 e* M" U
（10)将病毒浓缩液移出，分装后保存在病毒管中，-70℃长期保存。取其中一支
5 l) o0 x0 k1 [4 \9 G4 a" ]进行病毒生物学滴度测定。# K; S! j- p+ t4 q% Z

shihuijunm

超滤管就可以，但滤膜是100k的，Millipore的有卖

daviddow

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! h3 V! l* b6 s6 C& \8 i. ]过滤杯是在哪里买的？还有收集管？谢谢

huangcong1988

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* J6 m) }8 x2 k+ K
在一般的试剂耗材公司应该都能买到

daviddow

回复 huangcong1988 的帖子% f3 O1 p- a7 P7 ]

& a: o1 g0 L+ d$ J) S- O8 B国内的公司有吗？价格

huangcong1988

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8 ~) _6 ^' K- \- h7 r
2 x% U: Y$ X; l; K  e9 [2 D$ g. d& J这个不提清楚，呵呵，应该是不贵，耗材

wangyimei

如果有条件可以用BECMAN低温超高度离心机，26000rpm 2hours ,然后倒掉离心上清，可看到白色的病毒沉淀，再用PBS重悬