如何浓缩慢病毒？

sizhengliu

我要做慢病毒转染，现在想自己来浓缩慢病毒，看了一些资料，发现病毒浓度不高，浓缩是一个关键问题。我在的实验室有4度离心机，目前我还没有买任何试剂。请有经验的朋友路过指教，我怎样比较有效率的浓缩慢病毒？还需要什么东西呢？不胜感激！！

daviddow

超速离心，大约32000rpm，3个小时

sizhengliu

回复 daviddow 的帖子4 D+ a+ z1 y. H9 y. y% ~1 J" `' x

4 _9 p$ [" g( q/ t谢谢！用你的方法，你能得到的滴度一般是多少呢？

huangcong1988

  病毒的收获及浓缩7 M- J1 q1 M: O; _3 T+ r7 g( Y
（1)收集转染后48h（转染即可为0h计起）的293T细胞上清液。$ g2 @$ P- I7 ^( s- j  W1 m
（2)于4℃，4000g离心10 min，除去细胞碎片。2 t/ p$ M1 }/ P# H# S, A
（3)以0.45μm滤器过滤上清液于40ml超速离心管中。
! Z, Y; k- m3 K9 U（4)把病毒粗提液样品加入到过滤杯中（最多19 ml），盖上盖子。将过滤杯插5 N. P  y3 _1 O1 G- G
到滤过液收集管中。
4 b" ~3 Y' j9 e! u8 |/ h（5)组合好后，做好平衡，放在转头上。: z3 A! K6 Q) e' Y" G) S
（6)在4000g离心，至需要的病毒浓缩体积。通常需要的时间为10-15min。
4 W8 O. E) C* }. p/ z（7)离心结束后，取出离心装置，将过滤杯和下面的滤过液收集杯分开。/ o$ |* Q8 _. A: O6 K: g1 i
（8)将过滤杯倒扣在样品收集杯上。2 z8 M+ L# J- `6 D! q% d
（9)离心力不超过1000g,时间为2min。过高转速会导致样品损失。把离心杯从4 @, l2 V1 h0 u. \( M7 S$ M& [' r
样品收集杯上移开。样品收集杯中的即为病毒浓缩液。* z; x6 v, x. }6 d2 F# y1 E
（10)将病毒浓缩液移出，分装后保存在病毒管中，-70℃长期保存。取其中一支
* c8 p: G- G: Z0 U% v进行病毒生物学滴度测定。
1 [' |! J" p5 O: Y* r. w, {+ ~

shihuijunm

超滤管就可以，但滤膜是100k的，Millipore的有卖

daviddow

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; Z9 E0 C* C4 X0 W/ W+ N. W! n+ |7 l0 n
过滤杯是在哪里买的？还有收集管？谢谢

huangcong1988

回复 daviddow 的帖子; |! R, m% `) Y& _# a% m2 c

" n& D5 t: L: ^: w/ D& R6 {在一般的试剂耗材公司应该都能买到

daviddow

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" C/ C2 Q; P; X5 O; m: C' M  T: G- q5 \8 v& ]7 ?* v1 z) P! F; c
国内的公司有吗？价格

huangcong1988

回复 daviddow 的帖子) G+ J0 d4 V9 p3 }$ g

. L5 w3 R" j% P这个不提清楚，呵呵，应该是不贵，耗材

wangyimei

如果有条件可以用BECMAN低温超高度离心机，26000rpm 2hours ,然后倒掉离心上清，可看到白色的病毒沉淀，再用PBS重悬