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如何浓缩慢病毒?   [复制链接]

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包包
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楼主
发表于 2011-6-11 22:05 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
我要做慢病毒转染,现在想自己来浓缩慢病毒,看了一些资料,发现病毒浓度不高,浓缩是一个关键问题。我在的实验室有4度离心机,目前我还没有买任何试剂。请有经验的朋友路过指教,我怎样比较有效率的浓缩慢病毒?还需要什么东西呢?不胜感激!!
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沙发
发表于 2011-6-11 22:41 |只看该作者
超速离心,大约32000rpm,3个小时
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藤椅
发表于 2011-6-11 22:59 |只看该作者
回复 daviddow 的帖子" f% g( x6 G1 _" z1 }+ B$ @
9 V2 c: T' b; x* D9 H+ k# P3 J- ]
谢谢!用你的方法,你能得到的滴度一般是多少呢?
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板凳
发表于 2011-6-12 08:46 |只看该作者
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  病毒的收获及浓缩
9 L. l$ G# ~+ V7 r* E$ e/ ~+ v- c(1)收集转染后48h(转染即可为0h计起)的293T细胞上清液。  S. L: w  T" a& h" D
(2)于4℃,4000g离心10 min,除去细胞碎片。) ^1 k5 H) A% H1 O0 O2 c4 ~
(3)以0.45μm滤器过滤上清液于40ml超速离心管中。7 a* B; S: r& S4 }. i3 [
(4)把病毒粗提液样品加入到过滤杯中(最多19 ml),盖上盖子。将过滤杯插! k4 a. E4 O* Z
到滤过液收集管中。
* V5 e+ T  V) Q# g4 j9 p0 @6 a(5)组合好后,做好平衡,放在转头上。
4 [/ Z& \3 g5 h(6)在4000g离心,至需要的病毒浓缩体积。通常需要的时间为10-15min。
' K) z; {$ c8 q, F6 ?! D7 Y(7)离心结束后,取出离心装置,将过滤杯和下面的滤过液收集杯分开。
1 n& U* [& k2 S(8)将过滤杯倒扣在样品收集杯上。
6 D0 }% L$ ~( z/ s(9)离心力不超过1000g,时间为2min。过高转速会导致样品损失。把离心杯从
: F0 K6 X0 l4 V$ x4 h# Z样品收集杯上移开。样品收集杯中的即为病毒浓缩液。; s; Y. N" m( N9 j  ?" o- H4 |
(10)将病毒浓缩液移出,分装后保存在病毒管中,-70℃长期保存。取其中一支
1 D% b0 H3 o3 `进行病毒生物学滴度测定。1 u% w  o; q% w6 j  a
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报纸
发表于 2011-6-12 15:59 |只看该作者
超滤管就可以,但滤膜是100k的,Millipore的有卖
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地板
发表于 2011-6-13 08:50 |只看该作者
回复 huangcong1988 的帖子
& O1 l/ D, N, u# U3 {0 K8 H6 E) d  Q" D. k5 I, _) Y
过滤杯是在哪里买的?还有收集管?谢谢

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发表于 2011-6-13 09:59 |只看该作者
回复 daviddow 的帖子! N$ D3 @# Q! w1 C- K% B& b
( \6 E/ U* M0 s$ f
在一般的试剂耗材公司应该都能买到
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发表于 2011-6-13 21:22 |只看该作者
回复 huangcong1988 的帖子4 R' F; e5 N9 ?. w% e! R2 \/ ]

: V5 }" D$ W2 K' l: ]7 ]国内的公司有吗?价格

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9
发表于 2011-6-13 22:33 |只看该作者
回复 daviddow 的帖子
7 F9 o6 @: w) Z( e/ P8 w
  @& ?; ~4 k, Q5 f* Q' H这个不提清楚,呵呵,应该是不贵,耗材

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发表于 2011-8-2 00:07 |只看该作者
如果有条件可以用BECMAN低温超高度离心机,26000rpm 2hours ,然后倒掉离心上清,可看到白色的病毒沉淀,再用PBS重悬
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