如何浓缩慢病毒？

sizhengliu

我要做慢病毒转染，现在想自己来浓缩慢病毒，看了一些资料，发现病毒浓度不高，浓缩是一个关键问题。我在的实验室有4度离心机，目前我还没有买任何试剂。请有经验的朋友路过指教，我怎样比较有效率的浓缩慢病毒？还需要什么东西呢？不胜感激！！

daviddow

超速离心，大约32000rpm，3个小时

sizhengliu

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( u+ f) K' Q, p! ^* ]4 F+ {5 Y
谢谢！用你的方法，你能得到的滴度一般是多少呢？

huangcong1988

  病毒的收获及浓缩
* q: _' }" I" k, S5 G% l（1)收集转染后48h（转染即可为0h计起）的293T细胞上清液。9 Z1 [  Z# _4 }8 v5 k; |( t
（2)于4℃，4000g离心10 min，除去细胞碎片。! y6 n6 H; S, w
（3)以0.45μm滤器过滤上清液于40ml超速离心管中。
  q; }7 g9 T' E. j5 P' s（4)把病毒粗提液样品加入到过滤杯中（最多19 ml），盖上盖子。将过滤杯插
6 @: ~. P9 H2 b* r2 N到滤过液收集管中。
8 o1 V( ~/ @7 K4 q6 E. ~（5)组合好后，做好平衡，放在转头上。4 O0 B4 B5 o; Q' p
（6)在4000g离心，至需要的病毒浓缩体积。通常需要的时间为10-15min。
% @/ y3 B/ M7 J3 r- Z# Q9 f（7)离心结束后，取出离心装置，将过滤杯和下面的滤过液收集杯分开。9 Z$ i& y6 Z1 z9 b
（8)将过滤杯倒扣在样品收集杯上。
. h: f! H9 F1 ^% y, Q" e. A（9)离心力不超过1000g,时间为2min。过高转速会导致样品损失。把离心杯从
( S# x" v& h) ], j- e% [! m2 U' _样品收集杯上移开。样品收集杯中的即为病毒浓缩液。
9 M8 N  L2 T: c（10)将病毒浓缩液移出，分装后保存在病毒管中，-70℃长期保存。取其中一支7 d5 a( M* n- r) ^0 y& @+ y9 O1 l
进行病毒生物学滴度测定。. |2 E6 Q1 J( `1 @3 ^; m

shihuijunm

超滤管就可以，但滤膜是100k的，Millipore的有卖

daviddow

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. A$ ~& E' i" d; n! m( _/ h$ \过滤杯是在哪里买的？还有收集管？谢谢

huangcong1988

回复 daviddow 的帖子* S3 Q) O7 Y$ L1 s  Z- J

4 l9 D* o0 s& Q; d9 R2 e在一般的试剂耗材公司应该都能买到

daviddow

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; M8 }5 A. f, k2 m& ^% ?
6 X5 T/ J: [7 ?/ x. L4 J. l国内的公司有吗？价格

huangcong1988

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- H: M' V. k- A; }" [% J+ _这个不提清楚，呵呵，应该是不贵，耗材

wangyimei

如果有条件可以用BECMAN低温超高度离心机，26000rpm 2hours ,然后倒掉离心上清，可看到白色的病毒沉淀，再用PBS重悬