干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站

 

 

搜索
朗日生物

免疫细胞治疗专区

欢迎关注干细胞微信公众号

  
查看: 117270|回复: 15
go

如何浓缩慢病毒?   [复制链接]

Rank: 2

积分
176 
威望
176  
包包
1265  
楼主
发表于 2011-6-11 22:05 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
我要做慢病毒转染,现在想自己来浓缩慢病毒,看了一些资料,发现病毒浓度不高,浓缩是一个关键问题。我在的实验室有4度离心机,目前我还没有买任何试剂。请有经验的朋友路过指教,我怎样比较有效率的浓缩慢病毒?还需要什么东西呢?不胜感激!!
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 2 + 10 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 2  包包 + 10   查看全部评分

Rank: 3Rank: 3

积分
844 
威望
844  
包包
1  

金话筒 优秀会员

沙发
发表于 2011-6-11 22:41 |只看该作者
超速离心,大约32000rpm,3个小时
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 5 + 10 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 5  包包 + 10   查看全部评分

Rank: 2

积分
176 
威望
176  
包包
1265  
藤椅
发表于 2011-6-11 22:59 |只看该作者
回复 daviddow 的帖子2 J9 a" e! C$ o/ Z0 X
( u+ f) K' Q, p! ^* ]4 F+ {5 Y
谢谢!用你的方法,你能得到的滴度一般是多少呢?
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 1 + 5 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 1  包包 + 5   查看全部评分

Rank: 4

积分
2917 
威望
2917  
包包
6530  

优秀会员 金话筒

板凳
发表于 2011-6-12 08:46 |只看该作者
干细胞之家微信公众号
  病毒的收获及浓缩
* q: _' }" I" k, S5 G% l(1)收集转染后48h(转染即可为0h计起)的293T细胞上清液。9 Z1 [  Z# _4 }8 v5 k; |( t
(2)于4℃,4000g离心10 min,除去细胞碎片。! y6 n6 H; S, w
(3)以0.45μm滤器过滤上清液于40ml超速离心管中。
  q; }7 g9 T' E. j5 P' s(4)把病毒粗提液样品加入到过滤杯中(最多19 ml),盖上盖子。将过滤杯插
6 @: ~. P9 H2 b* r2 N到滤过液收集管中。
8 o1 V( ~/ @7 K4 q6 E. ~(5)组合好后,做好平衡,放在转头上。4 O0 B4 B5 o; Q' p
(6)在4000g离心,至需要的病毒浓缩体积。通常需要的时间为10-15min。
% @/ y3 B/ M7 J3 r- Z# Q9 f(7)离心结束后,取出离心装置,将过滤杯和下面的滤过液收集杯分开。9 Z$ i& y6 Z1 z9 b
(8)将过滤杯倒扣在样品收集杯上。
. h: f! H9 F1 ^% y, Q" e. A(9)离心力不超过1000g,时间为2min。过高转速会导致样品损失。把离心杯从
( S# x" v& h) ], j- e% [! m2 U' _样品收集杯上移开。样品收集杯中的即为病毒浓缩液。
9 M8 N  L2 T: c(10)将病毒浓缩液移出,分装后保存在病毒管中,-70℃长期保存。取其中一支7 d5 a( M* n- r) ^0 y& @+ y9 O1 l
进行病毒生物学滴度测定。. |2 E6 Q1 J( `1 @3 ^; m
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 20 + 30 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 20  包包 + 30   查看全部评分

Rank: 2

积分
292 
威望
292  
包包
697  

优秀会员

报纸
发表于 2011-6-12 15:59 |只看该作者
超滤管就可以,但滤膜是100k的,Millipore的有卖
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 2 + 10 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 2  包包 + 10   查看全部评分

Rank: 3Rank: 3

积分
844 
威望
844  
包包
1  

金话筒 优秀会员

地板
发表于 2011-6-13 08:50 |只看该作者
回复 huangcong1988 的帖子1 C) g  \- H+ t5 ^

. A$ ~& E' i" d; n! m( _/ h$ \过滤杯是在哪里买的?还有收集管?谢谢

Rank: 4

积分
2917 
威望
2917  
包包
6530  

优秀会员 金话筒

7
发表于 2011-6-13 09:59 |只看该作者
回复 daviddow 的帖子* S3 Q) O7 Y$ L1 s  Z- J

4 l9 D* o0 s& Q; d9 R2 e在一般的试剂耗材公司应该都能买到
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 2 + 5 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 2  包包 + 5   查看全部评分

Rank: 3Rank: 3

积分
844 
威望
844  
包包
1  

金话筒 优秀会员

8
发表于 2011-6-13 21:22 |只看该作者
回复 huangcong1988 的帖子
; M8 }5 A. f, k2 m& ^% ?
6 X5 T/ J: [7 ?/ x. L4 J. l国内的公司有吗?价格

Rank: 4

积分
2917 
威望
2917  
包包
6530  

优秀会员 金话筒

9
发表于 2011-6-13 22:33 |只看该作者
回复 daviddow 的帖子' o7 d, x. K' R! e) ~- R3 T) u' u

- H: M' V. k- A; }" [% J+ _这个不提清楚,呵呵,应该是不贵,耗材

Rank: 3Rank: 3

积分
417 
威望
417  
包包
409  

金话筒 优秀会员

10
发表于 2011-8-2 00:07 |只看该作者
如果有条件可以用BECMAN低温超高度离心机,26000rpm 2hours ,然后倒掉离心上清,可看到白色的病毒沉淀,再用PBS重悬
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 5 + 10 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 5  包包 + 10   查看全部评分

‹ 上一主题|下一主题
你需要登录后才可以回帖 登录 | 注册
验证问答 换一个

Archiver|干细胞之家 ( 吉ICP备2021004615号-3 )

GMT+8, 2025-6-12 08:12

Powered by Discuz! X1.5

© 2001-2010 Comsenz Inc.