如何浓缩慢病毒？

sizhengliu

我要做慢病毒转染，现在想自己来浓缩慢病毒，看了一些资料，发现病毒浓度不高，浓缩是一个关键问题。我在的实验室有4度离心机，目前我还没有买任何试剂。请有经验的朋友路过指教，我怎样比较有效率的浓缩慢病毒？还需要什么东西呢？不胜感激！！

daviddow

超速离心，大约32000rpm，3个小时

sizhengliu

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) J# }3 Q1 o" `! X# g7 B
谢谢！用你的方法，你能得到的滴度一般是多少呢？

huangcong1988

  病毒的收获及浓缩$ H/ f$ c' H5 a1 a% i7 v
（1)收集转染后48h（转染即可为0h计起）的293T细胞上清液。
& J1 d+ {1 w5 @6 g（2)于4℃，4000g离心10 min，除去细胞碎片。5 a0 e  U+ ~; V3 N3 r
（3)以0.45μm滤器过滤上清液于40ml超速离心管中。$ V5 _' i6 k# [& i
（4)把病毒粗提液样品加入到过滤杯中（最多19 ml），盖上盖子。将过滤杯插) B' I9 Z2 `3 \. }% [0 E
到滤过液收集管中。
- p# V1 o9 m. h/ T4 M6 _% E（5)组合好后，做好平衡，放在转头上。
1 l$ ^2 c: ~% [) y（6)在4000g离心，至需要的病毒浓缩体积。通常需要的时间为10-15min。
# k/ J( ~9 }  X2 U（7)离心结束后，取出离心装置，将过滤杯和下面的滤过液收集杯分开。) k7 i# ~8 I* [* d
（8)将过滤杯倒扣在样品收集杯上。
7 N+ C$ D. ~6 r, r1 W) i7 y( q; f7 y5 W（9)离心力不超过1000g,时间为2min。过高转速会导致样品损失。把离心杯从8 C" t' o; p1 h/ q
样品收集杯上移开。样品收集杯中的即为病毒浓缩液。
/ a8 X: P1 I8 R0 ?% ]5 ~（10)将病毒浓缩液移出，分装后保存在病毒管中，-70℃长期保存。取其中一支
& }/ P5 f9 Z  R进行病毒生物学滴度测定。
# l" o" n% u& M" l: \" `3 N

shihuijunm

超滤管就可以，但滤膜是100k的，Millipore的有卖

daviddow

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3 u+ ~- @1 |8 Z6 F  l, K" K, J. o
. T. b7 x5 D* S( ]$ i过滤杯是在哪里买的？还有收集管？谢谢

huangcong1988

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/ w, j, C7 z& A. l$ B; {
0 \0 B8 l1 v" d# C2 i在一般的试剂耗材公司应该都能买到

daviddow

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) \+ W! G* D  Q6 O6 }: A国内的公司有吗？价格

huangcong1988

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# G7 V" f+ k1 W$ |, n1 |
( r) V* D" A0 _% q这个不提清楚，呵呵，应该是不贵，耗材

wangyimei

如果有条件可以用BECMAN低温超高度离心机，26000rpm 2hours ,然后倒掉离心上清，可看到白色的病毒沉淀，再用PBS重悬