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病毒的收获及浓缩
* q: _' }" I" k, S5 G% l(1)收集转染后48h(转染即可为0h计起)的293T细胞上清液。9 Z1 [ Z# _4 }8 v5 k; |( t
(2)于4℃,4000g离心10 min,除去细胞碎片。! y6 n6 H; S, w
(3)以0.45μm滤器过滤上清液于40ml超速离心管中。
q; }7 g9 T' E. j5 P' s(4)把病毒粗提液样品加入到过滤杯中(最多19 ml),盖上盖子。将过滤杯插
6 @: ~. P9 H2 b* r2 N到滤过液收集管中。
8 o1 V( ~/ @7 K4 q6 E. ~(5)组合好后,做好平衡,放在转头上。4 O0 B4 B5 o; Q' p
(6)在4000g离心,至需要的病毒浓缩体积。通常需要的时间为10-15min。
% @/ y3 B/ M7 J3 r- Z# Q9 f(7)离心结束后,取出离心装置,将过滤杯和下面的滤过液收集杯分开。9 Z$ i& y6 Z1 z9 b
(8)将过滤杯倒扣在样品收集杯上。
. h: f! H9 F1 ^% y, Q" e. A(9)离心力不超过1000g,时间为2min。过高转速会导致样品损失。把离心杯从
( S# x" v& h) ], j- e% [! m2 U' _样品收集杯上移开。样品收集杯中的即为病毒浓缩液。
9 M8 N L2 T: c(10)将病毒浓缩液移出,分装后保存在病毒管中,-70℃长期保存。取其中一支7 d5 a( M* n- r) ^0 y& @+ y9 O1 l
进行病毒生物学滴度测定。. |2 E6 Q1 J( `1 @3 ^; m
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