如何浓缩慢病毒？

sizhengliu

我要做慢病毒转染，现在想自己来浓缩慢病毒，看了一些资料，发现病毒浓度不高，浓缩是一个关键问题。我在的实验室有4度离心机，目前我还没有买任何试剂。请有经验的朋友路过指教，我怎样比较有效率的浓缩慢病毒？还需要什么东西呢？不胜感激！！

daviddow

超速离心，大约32000rpm，3个小时

sizhengliu

回复 daviddow 的帖子" f% g( x6 G1 _" z1 }+ B$ @
9 V2 c: T' b; x* D9 H+ k# P3 J- ]
谢谢！用你的方法，你能得到的滴度一般是多少呢？

huangcong1988

  病毒的收获及浓缩
9 L. l$ G# ~+ V7 r* E$ e/ ~+ v- c（1)收集转染后48h（转染即可为0h计起）的293T细胞上清液。  S. L: w  T" a& h" D
（2)于4℃，4000g离心10 min，除去细胞碎片。) ^1 k5 H) A% H1 O0 O2 c4 ~
（3)以0.45μm滤器过滤上清液于40ml超速离心管中。7 a* B; S: r& S4 }. i3 [
（4)把病毒粗提液样品加入到过滤杯中（最多19 ml），盖上盖子。将过滤杯插! k4 a. E4 O* Z
到滤过液收集管中。
* V5 e+ T  V) Q# g4 j9 p0 @6 a（5)组合好后，做好平衡，放在转头上。
4 [/ Z& \3 g5 h（6)在4000g离心，至需要的病毒浓缩体积。通常需要的时间为10-15min。
' K) z; {$ c8 q, F6 ?! D7 Y（7)离心结束后，取出离心装置，将过滤杯和下面的滤过液收集杯分开。
1 n& U* [& k2 S（8)将过滤杯倒扣在样品收集杯上。
6 D0 }% L$ ~( z/ s（9)离心力不超过1000g,时间为2min。过高转速会导致样品损失。把离心杯从
: F0 K6 X0 l4 V$ x4 h# Z样品收集杯上移开。样品收集杯中的即为病毒浓缩液。; s; Y. N" m( N9 j  ?" o- H4 |
（10)将病毒浓缩液移出，分装后保存在病毒管中，-70℃长期保存。取其中一支
1 D% b0 H3 o3 `进行病毒生物学滴度测定。1 u% w  o; q% w6 j  a

shihuijunm

超滤管就可以，但滤膜是100k的，Millipore的有卖

daviddow

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& O1 l/ D, N, u# U3 {0 K8 H6 E) d  Q" D. k5 I, _) Y
过滤杯是在哪里买的？还有收集管？谢谢

huangcong1988

回复 daviddow 的帖子! N$ D3 @# Q! w1 C- K% B& b
( \6 E/ U* M0 s$ f
在一般的试剂耗材公司应该都能买到

daviddow

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: V5 }" D$ W2 K' l: ]7 ]国内的公司有吗？价格

huangcong1988

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7 F9 o6 @: w) Z( e/ P8 w
  @& ?; ~4 k, Q5 f* Q' H这个不提清楚，呵呵，应该是不贵，耗材

wangyimei

如果有条件可以用BECMAN低温超高度离心机，26000rpm 2hours ,然后倒掉离心上清，可看到白色的病毒沉淀，再用PBS重悬