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病毒的收获及浓缩
9 L. l$ G# ~+ V7 r* E$ e/ ~+ v- c(1)收集转染后48h(转染即可为0h计起)的293T细胞上清液。 S. L: w T" a& h" D
(2)于4℃,4000g离心10 min,除去细胞碎片。) ^1 k5 H) A% H1 O0 O2 c4 ~
(3)以0.45μm滤器过滤上清液于40ml超速离心管中。7 a* B; S: r& S4 }. i3 [
(4)把病毒粗提液样品加入到过滤杯中(最多19 ml),盖上盖子。将过滤杯插! k4 a. E4 O* Z
到滤过液收集管中。
* V5 e+ T V) Q# g4 j9 p0 @6 a(5)组合好后,做好平衡,放在转头上。
4 [/ Z& \3 g5 h(6)在4000g离心,至需要的病毒浓缩体积。通常需要的时间为10-15min。
' K) z; {$ c8 q, F6 ?! D7 Y(7)离心结束后,取出离心装置,将过滤杯和下面的滤过液收集杯分开。
1 n& U* [& k2 S(8)将过滤杯倒扣在样品收集杯上。
6 D0 }% L$ ~( z/ s(9)离心力不超过1000g,时间为2min。过高转速会导致样品损失。把离心杯从
: F0 K6 X0 l4 V$ x4 h# Z样品收集杯上移开。样品收集杯中的即为病毒浓缩液。; s; Y. N" m( N9 j ?" o- H4 |
(10)将病毒浓缩液移出,分装后保存在病毒管中,-70℃长期保存。取其中一支
1 D% b0 H3 o3 `进行病毒生物学滴度测定。1 u% w o; q% w6 j a
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