如何浓缩慢病毒？

sizhengliu

我要做慢病毒转染，现在想自己来浓缩慢病毒，看了一些资料，发现病毒浓度不高，浓缩是一个关键问题。我在的实验室有4度离心机，目前我还没有买任何试剂。请有经验的朋友路过指教，我怎样比较有效率的浓缩慢病毒？还需要什么东西呢？不胜感激！！

daviddow

超速离心，大约32000rpm，3个小时

sizhengliu

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  n7 ^- r; f# {  W# E4 n3 t" J, m% U0 T3 |, \! j7 V4 R
谢谢！用你的方法，你能得到的滴度一般是多少呢？

huangcong1988

  病毒的收获及浓缩
/ e& U- n# r8 a- R（1)收集转染后48h（转染即可为0h计起）的293T细胞上清液。
6 }* H* v1 i2 a6 `" }+ F（2)于4℃，4000g离心10 min，除去细胞碎片。
5 ?0 O# c# n6 e9 R（3)以0.45μm滤器过滤上清液于40ml超速离心管中。
+ b6 N- q8 T7 k$ B! P（4)把病毒粗提液样品加入到过滤杯中（最多19 ml），盖上盖子。将过滤杯插
  m# Z* ^- W; L8 c) ]到滤过液收集管中。
6 l1 |& u& Y3 Z, i  h) l+ }; S（5)组合好后，做好平衡，放在转头上。
$ [: ~, _' F$ ~+ |+ d（6)在4000g离心，至需要的病毒浓缩体积。通常需要的时间为10-15min。. w6 T& h; V( [: t$ s! m
（7)离心结束后，取出离心装置，将过滤杯和下面的滤过液收集杯分开。! }, S. L/ ?2 ?3 Z: d
（8)将过滤杯倒扣在样品收集杯上。
8 m1 E8 ?; [2 q' V0 v+ x2 U$ [（9)离心力不超过1000g,时间为2min。过高转速会导致样品损失。把离心杯从
2 C; i; p  Z# i0 [样品收集杯上移开。样品收集杯中的即为病毒浓缩液。
/ p+ s: ~$ l. {) }8 a（10)将病毒浓缩液移出，分装后保存在病毒管中，-70℃长期保存。取其中一支4 q5 m/ K- O$ |/ p$ o+ i: l1 T7 {- `
进行病毒生物学滴度测定。# _! ~: @0 Y) z. }! c

shihuijunm

超滤管就可以，但滤膜是100k的，Millipore的有卖

daviddow

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$ `5 r7 c4 ]* G2 V+ Z- Y& Q
  _% B3 ]( I/ z  i9 k$ M. o过滤杯是在哪里买的？还有收集管？谢谢

huangcong1988

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) W9 l6 r2 r+ w( x, i在一般的试剂耗材公司应该都能买到

daviddow

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+ Q2 M$ ?# y6 {6 K# h; a5 ]
" x) n0 U! t; m/ e0 c; \% e5 y国内的公司有吗？价格

huangcong1988

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9 b: z5 t7 \# U! E$ ?. C这个不提清楚，呵呵，应该是不贵，耗材

wangyimei

如果有条件可以用BECMAN低温超高度离心机，26000rpm 2hours ,然后倒掉离心上清，可看到白色的病毒沉淀，再用PBS重悬