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[讨论] 这里基本没人有拍细胞的电镜照片? [复制链接]

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楼主
发表于 2011-6-16 14:08 |显示全部帖子
不知道楼主想做哪方面的研究?( t! N, \, S& c
一般来说,看细胞形态的话做常规病理切片HE染色就行,
0 g/ t0 S0 l! t& V6 M! w这里有两种状况,如果是一般的培养细胞,贴壁细胞的话
+ ?( P; B/ y; Z2 `; Y4 v- ?6 g用盖玻片培养后染HE或者做组化、杂交之类的,如果是
/ F" u4 b4 L3 X' k/ N7 w& [+ \2 E悬浮细胞的话可以用细胞甩片机甩到载玻片上。2 Y! t; s: d% {3 I" N" U" _8 g+ l
然后再进行HE或者做组化、杂交之类的实验。
$ q8 M  R- W  A" A. h# v8 y& V另一种是干细胞方面培养的细胞团块,可以做冰冻切& \5 {& a6 }3 X1 r, `# N( a! H/ k
片后染色或者做石蜡切片也行。至于说具体怎么做,
: Z7 j  w$ h1 I% ?8 n0 i+ |这是技术人员的事,我想作为我们知道怎么去利用这些
- p+ Q; n5 `0 w2 @" s8 Z0 Q方法去完成或实现自己实验就行了。: p% U( J! Q9 {# G0 g
: f: w0 J5 M9 ~  L% g# h& a9 I. ?" |& r
如果是想研究细胞内细胞器的发育或损伤情况可能才需用到电镜。" l; F, p" _* f  X3 l
但楼主说的流程又不是电镜的流程,所以可能楼主是混淆了概念。, \# E* j3 ~% s
普通显微镜和电镜是两种不同的东西。) v- J5 D* q+ s  ^$ D( |
- i% i" ?6 C8 I% _' Y
不知道我的经验对楼主有无帮助。# M0 T- k' x7 Z

- R4 A/ |# ?: r5 x
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沙发
发表于 2011-6-16 17:18 |显示全部帖子
回复 jiojoo 的帖子+ R5 S# B( h2 m) P6 \/ j3 I) J) T
6 o& b$ \% R' v: c6 z5 q9 o
呵呵,你们的电镜制样也需要自己去弄吗?% Q% N; a" k( R( C) b
我认为那是电镜室工作人员的事,7 G7 P. n3 q4 D/ ~) o" e! B
你只需要把取材好,选择好需要观察的面,) P  H9 |) t. e! {
用2.5%戊二醛固定好就行。
+ Z$ G2 y8 W3 ?. V! u
! F. V- b$ P/ C7 _0 u一般地:扫描电镜:取材,漂洗,2.5%戊二醛固定,
1 L1 _; t* I. h8 |# K( i漂洗,1%锇酸后固定2h,漂洗,5 V/ m) S8 D/ H3 w% ~1 r
梯度丙酮(50%、70%、80%、95%、100%)各15min脱水,
" M* @6 O- b2 A# ]) e- N乙酸异戊酯置换或叔丁醇30~60min,临界点干燥(或冷冻干燥)," H0 o0 R; y( A& P
镀膜,观察。
% W! B! B' _; F' X% ^; H3 j1 t
! l  s/ ]+ c( d. C9 _. v, w4 r扫描电镜图像有4个方面的缺陷:荷电效应,损伤,污染,边缘效应。8 m1 d7 z' x7 X, Z
+ u/ Z6 ^& _1 J/ p7 e- r  P, A
建议楼主把技术活还给技术人员,像这种分析植入材料、
# J" Q  @* E, H# y植入支架等他们做得多,自然会处理好你的样品。你等着要结果就行。
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