ips复苏的问题

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ips离心去除DMSO后，重悬时是要彻底吹散成单细胞吗 如图2 还是有小集落是正常的 如图1

majing217

吹得太散了，很难形成克隆( g7 a* z% T( T1 F; I

sarah19860420

如果是小鼠的可以吹成单个细胞。如果是人的IPS那么最好吹成一些细胞团为宜。亲身体验。第一次传人的IPS，消化一定时间后，细胞成大团状，怎么都吹不散，后来气愤了，对细胞进行了一番折磨，基本上都是单个的了，（这是我没想到的结果），现在细胞也在报复我，基本看不见几个克隆，而且不生长，只能耐心的等下去了。555

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0 K1 V- Z# A9 ~: Q0 ^% p5 v" ?7 Q) f" m4 N6 m9 N# a4 g
非常感谢 但是没下到全文呵呵

song58

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# S$ [1 F, b6 ?' q+ \9 M. ]: _' R# ]2 o* r$ M
恩，我现在很久没用过了，但是以前用的时候确实是在传代前后都处理，而且这个方法就是follow文献里的protocol。
/ G% G0 S$ G, U$ N* E# X! V; s! Q/ N2 X5 [- j) x
今天我特意搜了一下，应该可以作为参考: z, w2 \/ o9 L; ]% W8 T3 V
An efficient and easy-to-use cryopreservation protocol for human ES and iPS cells.
7 [0 {; N; J( ]  e1 g/ I. q3 H
3 b$ a- Q7 S$ E, N% X7 @, tBaharvand H, Salekdeh GH, Taei A, Mollamohammadi S./ a  L1 b0 e+ }% [, D, ~- z. s+ @
; M) p& f; k& \. N
Nat Protoc. 2010;5(3):588-94. ' [4 K' D( k/ A6 w: ~

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回复 song58 的帖子. v- l0 R: e/ e
. P1 T* L3 N0 m; U" v
Y27632 不是提高复苏存活率吗？是复苏后加入吧  咋是传代前后呢

song58

个人经验：4 N+ E2 s. a) _- O
100nM，传代前后各处理8小时

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回复 guoanson 的帖子
4 @. j  M% j3 l. l$ g! Y" I1 L4 Q  O4 K: q$ s* R7 F3 Y6 w
Y 要加多少 & f* h- u# G" @$ t
还有其他的？, j% X: L4 x4 [
多谢啊

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Y27632使用量是多少 ？？？？

wolfgang

鼠的iPS单细胞是必须的。人的相反，必须保持团块状。