ips复苏的问题

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ips离心去除DMSO后，重悬时是要彻底吹散成单细胞吗 如图2 还是有小集落是正常的 如图1

majing217

吹得太散了，很难形成克隆
2 t; {# Z  y% H/ l- e4 S# @! }+ `

sarah19860420

如果是小鼠的可以吹成单个细胞。如果是人的IPS那么最好吹成一些细胞团为宜。亲身体验。第一次传人的IPS，消化一定时间后，细胞成大团状，怎么都吹不散，后来气愤了，对细胞进行了一番折磨，基本上都是单个的了，（这是我没想到的结果），现在细胞也在报复我，基本看不见几个克隆，而且不生长，只能耐心的等下去了。555

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回复 song58 的帖子
- R( j4 Y  o- p: S7 U2 k5 s, l& X: \1 ^1 }
非常感谢 但是没下到全文呵呵

song58

回复 573639471 的帖子" e6 m1 k7 P2 G, U
- ~& e, E3 E2 O/ H' C" y2 R
恩，我现在很久没用过了，但是以前用的时候确实是在传代前后都处理，而且这个方法就是follow文献里的protocol。9 {; k) Y2 ], N" M( w# g0 ?. n
' r  G) l* m+ P. n
今天我特意搜了一下，应该可以作为参考5 o* t4 l# N+ h7 z5 m2 n. K
An efficient and easy-to-use cryopreservation protocol for human ES and iPS cells.1 f- k) M  h/ Y- \0 a. [) l8 \& E* e
0 o; n+ i0 Z9 e' Y( }/ Z
Baharvand H, Salekdeh GH, Taei A, Mollamohammadi S.
7 O7 [3 ~/ I; b+ _  h& A, A! v8 S( o' m0 U" f! S
Nat Protoc. 2010;5(3):588-94. 0 O1 a/ v/ e) G4 [2 E  v

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回复 song58 的帖子
  j' Y; p8 X/ Z( D5 x& @; \- G, C' c% w7 A$ f) }$ X
Y27632 不是提高复苏存活率吗？是复苏后加入吧  咋是传代前后呢

song58

个人经验：
1 _  J6 k# k) J- ?: Z- T6 b100nM，传代前后各处理8小时

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回复 guoanson 的帖子
' z, n; G, b0 c+ X* p1 \0 \: t" F9 G4 Q0 Q# J  M' o7 }# I
Y 要加多少 0 W; [) ]9 B3 o
还有其他的？
& e; M4 [4 n  g5 i; m/ p; T& M, {多谢啊

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Y27632使用量是多少 ？？？？

wolfgang

鼠的iPS单细胞是必须的。人的相反，必须保持团块状。