ips复苏的问题

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ips离心去除DMSO后，重悬时是要彻底吹散成单细胞吗 如图2 还是有小集落是正常的 如图1

majing217

吹得太散了，很难形成克隆
2 C7 m7 ?0 M* M. {1 x) W

sarah19860420

如果是小鼠的可以吹成单个细胞。如果是人的IPS那么最好吹成一些细胞团为宜。亲身体验。第一次传人的IPS，消化一定时间后，细胞成大团状，怎么都吹不散，后来气愤了，对细胞进行了一番折磨，基本上都是单个的了，（这是我没想到的结果），现在细胞也在报复我，基本看不见几个克隆，而且不生长，只能耐心的等下去了。555

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9 X3 S; N& [# N! a, v+ b
: T+ u9 S' `# O5 x3 {: u非常感谢 但是没下到全文呵呵

song58

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4 g1 E' I# G2 I2 e# n/ g( w( h0 L1 o% D. g0 R3 y, z$ H
恩，我现在很久没用过了，但是以前用的时候确实是在传代前后都处理，而且这个方法就是follow文献里的protocol。' L$ h: ^+ _9 o) j
, @3 j7 R7 Z+ {# Z5 {
今天我特意搜了一下，应该可以作为参考  w7 t+ n. a5 H" W
An efficient and easy-to-use cryopreservation protocol for human ES and iPS cells.
3 y; m9 \, I: T4 g, R4 `  z8 z4 x+ E( B" U1 s3 s/ J1 U7 H
Baharvand H, Salekdeh GH, Taei A, Mollamohammadi S.
" F. l6 I. P3 j" U! w7 q0 {  g4 i8 N! `! o! x0 ]
Nat Protoc. 2010;5(3):588-94. 8 o" }" v2 U. R1 R/ e$ Q2 Z

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回复 song58 的帖子, ~; ~$ J7 X6 D
, d0 z% ~) p3 d5 j5 Y
Y27632 不是提高复苏存活率吗？是复苏后加入吧  咋是传代前后呢

song58

个人经验：
6 Y, B7 F1 P% r+ f100nM，传代前后各处理8小时

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回复 guoanson 的帖子
; F5 @3 [/ A3 S' U% C6 H; y) f+ U
9 w1 d. r" }3 R9 PY 要加多少 & |/ `; ~* {: s! J
还有其他的？
& V. @* k( q$ s& K2 X6 [$ U多谢啊

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Y27632使用量是多少 ？？？？

wolfgang

鼠的iPS单细胞是必须的。人的相反，必须保持团块状。