ips复苏的问题

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ips离心去除DMSO后，重悬时是要彻底吹散成单细胞吗 如图2 还是有小集落是正常的 如图1

majing217

吹得太散了，很难形成克隆* F) v, M5 h" v. K" X; }% q, l8 z7 I

sarah19860420

如果是小鼠的可以吹成单个细胞。如果是人的IPS那么最好吹成一些细胞团为宜。亲身体验。第一次传人的IPS，消化一定时间后，细胞成大团状，怎么都吹不散，后来气愤了，对细胞进行了一番折磨，基本上都是单个的了，（这是我没想到的结果），现在细胞也在报复我，基本看不见几个克隆，而且不生长，只能耐心的等下去了。555

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回复 song58 的帖子8 n. ?# C0 Q( C( F1 v9 k: c
1 P' ~- d' b* Z" X
非常感谢 但是没下到全文呵呵

song58

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! D' h0 ]0 I3 u% z' K5 X
2 p- E8 P, k" r. X: W恩，我现在很久没用过了，但是以前用的时候确实是在传代前后都处理，而且这个方法就是follow文献里的protocol。
: y) L. h% e3 `+ t! L
: T' z, h+ z% B. F" T8 {! K今天我特意搜了一下，应该可以作为参考
4 j* E% `* O" N* S* mAn efficient and easy-to-use cryopreservation protocol for human ES and iPS cells.
: c- ]* @* l% I# h8 y( c' H; F( h0 \- X) g/ p9 {" z
Baharvand H, Salekdeh GH, Taei A, Mollamohammadi S.3 O+ ^( G8 H0 t% a0 W! P: S

* K. c1 r, m/ g+ e5 ?Nat Protoc. 2010;5(3):588-94.
+ l0 e$ v5 v9 D5 ~( Q7 \) V

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回复 song58 的帖子
- w# Y1 |" ?% }; A% _% ?+ N7 k# S1 e. v, P9 C# G, q, D" s4 d- s3 D
Y27632 不是提高复苏存活率吗？是复苏后加入吧  咋是传代前后呢

song58

个人经验：
+ ^& n- a4 c* W# s- }100nM，传代前后各处理8小时

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回复 guoanson 的帖子
) P: u9 m1 G9 p. m% M4 t
5 V, v4 S& J5 G% y6 TY 要加多少
, L# s! s# }+ H. b还有其他的？
& q- P5 T: O8 w1 U多谢啊

573639471

Y27632使用量是多少 ？？？？

wolfgang

鼠的iPS单细胞是必须的。人的相反，必须保持团块状。