试着提了两次大鼠原代BMSC，均以失败告终，前辈们给些建议吧，万分感谢

taoli10000

提取的是大鼠的BMSC 细胞，腿上的两根骨头都取了，按照别人的一般操作方法进行的，直接用培养基冲洗骨髓，然后两根骨头分装至两个T25的培养瓶，所用的培养基是GIBICO买的低糖的500ml的，然后自己加的血清（10%），双抗（1%），放置三天后，有些是伸展贴壁的非常少，可以数的清，有的是贴壁的细胞都是圆圆的很多，不像是所要的细胞，感觉这些圆的细胞抑制那些伸展开的细胞生长，有些伸展的细胞较多些，呈集落生长，然后堆叠起来，但是总体上数量还是不够多，所有的细胞传代后均是同样的命运：不贴壁啊！传代消化差不多两分钟吧，然后轻敲瓶底，轻轻吹打几次。。。
) s5 a9 ~( h' I3 F3 ~6 B% ?由于条件限制，不能拍照，不知道问题到底出在哪里，在这里请教大家，希望给点建议，打算再尝试提取两次，又担心再次重复这样的问题。。。整个操作过程是看过别人有经验的人之后做的，但是就是养不起来啊！

taoli10000

回复 殆死悲爱 的帖子9 [$ H: B: D) {
$ e9 Q" P9 s) k+ B4 g4 S9 O
嗯，买的培养基里面有谷氨酰胺，但是那个东西很容易降解

taoli10000

回复 Learner 的帖子
3 z# T; @0 y( z. ^- ?/ ~! I7 A* h& M
嗯！呵呵，还是非常非常感谢哦！

taoli10000

回复 cheese 的帖子
- I0 _1 `  B" \' ~4 m! }  Y- J7 [1 M
' d, I8 ]6 b! l5 L2 B1 e! u嗯，是的，一般都是用6到8周的大鼠。。。

taoli10000

回复 taxuewuge 的帖子  i1 K7 r7 ~7 x, m  l- H- \1 s
1 p  P0 B" k, j6 f
嗯，谢谢，学习了哦！呵呵' J/ e; a* u( d

taoli10000

回复 luoziwei 的帖子2 N: }3 ~. W( J7 |

: E! i+ Y5 E! B) H& {6 L) O: i嗯，打算下次提取的时候两根骨头提一瓶T25 的试试
7 |2 B8 ]0 S% ^3 {. P# `% w: a

taoli10000

回复 飞翔的十字架 的帖子
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2 K* [9 F' h" x7 ^" C( U呵呵呵，没有图啊。。。。打算增加细胞密度看看怎么样。。。

taoli10000

回复 lizhiyong 的帖子
! e8 c& S5 u) y$ D! B% n; r8 n& k7 J5 W
好的，谢谢，尝试一下吧

taoli10000

回复 qiqishichaoren 的帖子; P8 o+ `3 Y: a# D; c+ q+ [# d% V
" G2 q) b$ C8 |/ V2 D" i2 c
培养基一般都是4度保存的，只有里面要加的谷胺酰胺之类的是-20度保存

taoli10000

回复 如冰 的帖子9 B) ?' a( d6 a0 q5 [- {
. Q0 \4 ]% q" y0 a& j
谢谢啊！