谁做过HIF1a的Western，怎么防止蛋白降解呐

人在日本

做Hif1a做了几个月了，什么都没做出来，试了几种抗体，效果都不好，这个蛋白极容易降解，谁有好办法不让它降解啊

james_0619

我做过，我用的办法就是冰上超声裂解，离心后马上变性电泳，虽然有点背景，还是能做出理想的条带

人在日本

james_0619 发表于 2011-7-23 20:42 " Z/ X6 F0 N3 E/ ~0 ]8 @
我做过，我用的办法就是冰上超声裂解，离心后马上变性电泳，虽然有点背景，还是能做出理想的条带

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具体步骤是什么样的呐？能和你联系吗？我的邮件ximingming2000@163.com

james_0619

取的海马部分，加入质量体积比1：10的裂解液，置于冰上剪碎，
6 f- @+ S" m: y8 A# s: |1 d) I( k超声粉碎3秒一次停9秒，共4次，4°C冰箱静置15分钟，
% E, }7 v1 a; y! z% `8 P5 ?. X* s0 ]然后低温离心15分钟取上清，加loading buffer，变性& A% g- G, c- X. `; }$ x
其他步骤就很一般了，我的邮箱是liu0619tiger@yahoo.com.cn