谁做过HIF1a的Western，怎么防止蛋白降解呐

人在日本

做Hif1a做了几个月了，什么都没做出来，试了几种抗体，效果都不好，这个蛋白极容易降解，谁有好办法不让它降解啊

james_0619

我做过，我用的办法就是冰上超声裂解，离心后马上变性电泳，虽然有点背景，还是能做出理想的条带

人在日本

james_0619 发表于 2011-7-23 20:42 ( D8 T9 y5 V/ g2 b; C+ x
我做过，我用的办法就是冰上超声裂解，离心后马上变性电泳，虽然有点背景，还是能做出理想的条带

2 z# h* U8 u. i. e. ?
具体步骤是什么样的呐？能和你联系吗？我的邮件ximingming2000@163.com

james_0619

取的海马部分，加入质量体积比1：10的裂解液，置于冰上剪碎，
+ n6 {# @0 y  ?# `. \( _超声粉碎3秒一次停9秒，共4次，4°C冰箱静置15分钟，9 W# i; ?9 z0 E4 ]4 z$ t5 @0 g: d
然后低温离心15分钟取上清，加loading buffer，变性5 s# t$ Z8 m' i- M4 ?0 I- n
其他步骤就很一般了，我的邮箱是liu0619tiger@yahoo.com.cn