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查看: 43481\|回复: 3	go 谁做过HIF1a的Western，怎么防止蛋白降解呐 [复制链接]

人在日本

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楼主

发表于 2011-6-30 19:02 |只看该作者 |倒序浏览 |打印

做Hif1a做了几个月了，什么都没做出来，试了几种抗体，效果都不好，这个蛋白极容易降解，谁有好办法不让它降解啊

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沙发

发表于 2011-7-23 20:42 |只看该作者

我做过，我用的办法就是冰上超声裂解，离心后马上变性电泳，虽然有点背景，还是能做出理想的条带

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人在日本

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藤椅

发表于 2011-9-29 03:08 |只看该作者

james_0619 发表于 2011-7-23 20:42
" W1 S! R4 b9 v! {9 U我做过，我用的办法就是冰上超声裂解，离心后马上变性电泳，虽然有点背景，还是能做出理想的条带

- e5 z( w5 y0 p
具体步骤是什么样的呐？能和你联系吗？我的邮件ximingming2000@163.com

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james_0619

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板凳

发表于 2011-10-8 12:29 |只看该作者

取的海马部分，加入质量体积比1：10的裂解液，置于冰上剪碎，) h0 G% V$ }# {( [% g
超声粉碎3秒一次停9秒，共4次，4°C冰箱静置15分钟，+ b/ ?9 C1 S% k* h- t P2 q5 ~
然后低温离心15分钟取上清，加loading buffer，变性9 v u6 l8 L- o' h1 r7 T0 j
其他步骤就很一般了，我的邮箱是liu0619tiger@yahoo.com.cn

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