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4 t% r- y3 J3 I6 E) U+ w支架材料的种子细胞接种方法（仅供参考）
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种子细胞接种之前，支架材料要经过严格的消毒灭菌，还要作预湿处理，使材料吸附一定量的水分，不经过预湿处理，细胞悬液接种在材料上不能存活。
# _( l: e! D5 d' @0 `7 b2 r在细胞与支架联合培养中除了要求支架材料有很好的细胞相容性以外，还希望细胞能更多地接种在支架材料上，牢固地附着在材料上，并且还能继续分裂、增殖及发挥生理功能。目前，较为通用的方法如下： $ `; j2 u* m& O8 E
1、浸渍法 , [3 B) R; W1 |+ ]% h- r+ P
预先制备好高密度细胞悬液，将已经过预湿处理的材料置于细胞悬液中，由于材料对细胞有良好的生物相容性，细胞逐渐向材料迁移并附着在材料上。 1 n/ ?) t. y2 `5 K" H4 s- x$ B0 X
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2、沉淀法 + |/ Y5 V3 r8 X
又称接种法，是最为常用的方法。包括一次沉淀法、二次沉淀法。前者是将已预湿处理的支架材料置于培养皿中，制备高密度的细胞悬液，用吸管将细胞悬液缓慢逐滴加于材料上，不使细胞从材料上溢出，放置培养箱中培养2~4h，待细胞充分黏附于材料后，缓慢加入培养液进行复合培养。后者是采用上述方法，沉积部分细胞到三维支架中，孵育一段时间（1~2h）使细胞黏附到材料中，然后再加入剩下的部分细胞，在37度条件下孵育（1~2h），产生种子细胞的第二次沉淀，以增加种子细胞沉积黏附的数量，还可以采用多次沉淀的方法，使黏附在材料上的细胞数量增加。 0 b* S) S- D; a( \/ W$ p) S! D
8 `: x2 t9 I5 K8 P0 w' `* ~9 b3、吸附法
5 {: X' q3 M" M一般采用负压吸附法，将已预湿的支架材料置于培养皿中，用吸管将高密度的细胞悬液逐滴滴加于材料上或将支架材料置于细胞悬液中，将整个培养皿置于负压容器中，施加一定的负压吸引力，细胞被负压吸附在支架材料上。该方法有利于细胞充分接触并黏附于材料内部，适用于支架材料孔径、孔隙率相对较小，细胞不易通过孔隙交通进入材料内部的情况。如果组织工程要求的支架材料孔径、孔隙较小，为了更多地接种细胞且尽可能使细胞均匀分布，可采用吸附法。但需要通过实验确定负压吸引力的值。负压力太大，有使细胞死亡的可能；负压力太小，又不能使细胞吸附在材料上。另外，接种过程中要严格消毒，尽量在无菌条件下进行。唯一缺点是容易污染。 & v/ K: ?! Z8 N; A& W8 c& M0 J6 k4 J
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4、动态培养系统 9 g: R* R( q$ M1 g1 `. |
将支架材料浸没在高密度细胞悬液中，采用旋转培养系统的方法可使细胞更均匀、更多地附着在支架材料上。
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$ }5 Z( G9 V5 q0 L, x/ x注意：种子细胞是否可接种成功，与支架材料、细胞类型及接种方法均有密切关系。不知楼上做何种细胞、采用何种支架材料？
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3 U4 P0 ?2 U( Y8 \另附几篇国内参考文献：
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发表于 2011-6-30 20:43
