PCR中最佳退火温度

langziforever

现在很多设计软件都能给你Tm值，但是由于所用算法不同，Tm值也会相差很大，一般来讲，PCR所用退火温度低于Tm值5度就可以了，值得注意的是，两个引物的Tm值不要相差太大，否则肯定对扩增不利！如果这样设置还无法得到满意的效果，建议你摸索退火温度，其实就是多做几管PCR而已，现在很多的PCR仪都可以设温度梯度，所以其实也很容易。在保证有产物的基础上，如果有杂带，而你的PCR产物对于提高退火温度又非常敏感，你可以尝试touch down PCR或者hot start PCR，需要自己去搜protocol吧！

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7 T3 z$ p: }& G: J4 e6 `  s' r- m2 ~
不知道你们的PCR仪可以设温度梯度嘛？如果可以就按照55到65来设吧！如果要单独一次次的做，那你需要保证其他的条件是一致的，比如体系完全混匀，加入引物的量等等！最好是在一个PCR上面做！

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回复 langziforever 的帖子! R/ j+ K2 F$ Y# D& E5 x4 J& x6 o

2 D4 b, G2 ^8 c' o对于一般的引物，我们以前55~60度之间基本都差不多，但有些引物可能也需要更高的温度，你开始时可以在较大的范围内摸索一下，比如50~65度，然后保证能P出来的前提下，再设较细的温度！具体多少度，你自己看啦！