培养的海马神经干细胞总是长不好，求助各位高手老师牛人，我实在找不出原因了

tk1504008

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8 O1 l/ F" L, ^' ?. C' |( U. ]  U我养的是新生大鼠（24h）的海马神经元，取海马后，剪碎，0.25%胰酶消化15min，含血清培养基终止消化，1300rpm离心5min,弃上清，用无血清培养基+2%B27培养，每个皿2ml，24h后全量换液，每隔3天半量换液。2 j  M/ Y' d; k
    很奇怪的是：在显微镜下看，培养皿底部环境很不干净，细胞周围有很多杂质，形状想很多小黑点，有大有小，不知道这些杂质是什么，是组织碎片？死亡细胞的裂解碎片？还是其他的？
9 U: Y/ \  i' e8 d" o    我本来以为是因为离心后弃上清时，留下的液体太多（我一般留1-1.5ml）,前天做实验时，离心后，我把液体全部吸干了，但是杂志还是很多，我实在找不到原因了，请高手大牛指教/ W8 ^  ]1 q& B: a2 K0 q( Q
     第一天全量换液后，杂质依然存在，虽然比换液前少了一点，但是还是很多。滤网滤不掉这些杂质，因为它们比细胞要小很多。杂质多的话细胞死的就很快，而且长得很不好。这些杂志是不是我取海马时，附带了很多周围结缔组织，所以杂质才这么多？7 D6 H7 O$ [" f
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湖南干细胞

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我在《干细胞实验指南》-裴雪涛的神经干细胞培养中，培养液中的EGF和bFGF 单位是ng/ml.帖子中的单位数量级太大了吧& `( J1 [( w  a" N1 H* }  l' `

湖南干细胞

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# _4 i7 F+ d0 W3 `7 {4 Q
$ q+ {: \; z0 j' K# t9 s请教培养神经元细胞和神经干细胞取材部位一样吗？都是海马区？5 W3 o7 r% ]% u* r

zhangxiudong

消化15分钟时间有点长了，因为组织来源，日龄的不同消化的时间也不同，如果背景还是很脏可以用胶原蛋白酶，应该没问题的

lihongjie553051

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谢谢，下下来了

细胞海洋

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lihongjie553051

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为什么我每次从网站下的文献的都不能看呢，我用的是Adobe reader  阅读器

lihongjie553051

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4 ]* s. w: t+ L0 D: o& F  qThank you very much!

细胞海洋

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什么胎鼠神经干细胞的取材最好是E14.5天% W4 A! J/ s1 J3 R; V+ \( n6 H
http://www.stemcell8.cn/thread-32029-1-1.html, J9 r8 U- A) E* B6 L

lihongjie553051

各位老师，哪位有胎鼠神经干细胞分离培养的详细步骤、注意事项，以及所需材料试剂的清单啊，能不能给我发到邮箱里，谢谢啦！
8 ?0 R9 x6 j! b% i, c7 u$ O5 t我邮箱地址是lihongjie553051@126.com