MEF分离培养

huangcong1988

MEF的培养  N6 s: ^& q0 B& ~
（1）孕12.5-14.5 d的昆明系清洁级雌鼠，引颈处死，75％的酒精浸泡5min。
3 G+ A' C' O3 i8 g8 T: P" b9 B（2）无菌打开腹腔，取出有胚胎的子宫，在预温的D-hanks液平皿中分离胚胎。
8 X! Y+ q6 i# x; x) i; J（3）去除头、四肢和内脏，用无菌眼科剪将胎鼠剪成1mm3大小碎片。  u: E9 P: Y" l5 [& M
（4）移入盛有0．0625％胰蛋白酶离心管中，37℃水浴恒温磁力搅拌消化，消; D# g8 n" F8 m+ [. `7 m5 J6 O
化3次,消化时间依次8min,8min,8min。0 S) \: R' z+ v/ Q% u8 f8 Z2 d
（5）每次消化后将细胞悬液收集到离心管中，加适量含10％胎牛血清的DMEM培
/ x  j' O8 a3 N3 ~* r养液中和胰蛋白酶，离心1000rpm 5min×3次，计算细胞量。
) a! F  E+ r, C$ ~4 s& T（6）三次弃上清后，以含1O％FBS的高糖DMEM培养液配制细胞悬液，吹打均匀，8 P; |: P) U; d4 d5 b0 Z
调整浓度为4×105个/ml接种于25 cm2培养瓶中。于37℃5％CO2培养箱中培养；24h后首次换液，之后隔日换液。, D0 ]& \# q4 J* ~# c
（7）消化传代，2-3d按1：3传代，冻存备用。

huangcong1988

回复 christophe 的帖子
/ N$ v" e' l6 c' e+ h+ h, k5 }8 Y( E- Q  R& B2 z1 U4 f
呵呵，这个是我们师兄做的，具体条件可能还是要你自己摸索，他当时做的时候也是自己摸索的适合自己的最佳条件

christophe

我是0.25 Trypin/EDTA 消化8min+8min,中间晃一下皿，不知是否有点消化过了？