MEF分离培养

huangcong1988

MEF的培养
0 W' P) [: V- c  p* m" t3 U（1）孕12.5-14.5 d的昆明系清洁级雌鼠，引颈处死，75％的酒精浸泡5min。% V) l( P! O* \
（2）无菌打开腹腔，取出有胚胎的子宫，在预温的D-hanks液平皿中分离胚胎。
, K0 l5 J8 V/ `# b: v（3）去除头、四肢和内脏，用无菌眼科剪将胎鼠剪成1mm3大小碎片。
! r- K. k* I9 z4 ]（4）移入盛有0．0625％胰蛋白酶离心管中，37℃水浴恒温磁力搅拌消化，消
) Q6 T3 b6 f( r! p6 J, R% ~化3次,消化时间依次8min,8min,8min。
) _  h  w" S4 |" O（5）每次消化后将细胞悬液收集到离心管中，加适量含10％胎牛血清的DMEM培
+ F5 X* d" j/ D养液中和胰蛋白酶，离心1000rpm 5min×3次，计算细胞量。5 h* m( l6 T# q% O0 A
（6）三次弃上清后，以含1O％FBS的高糖DMEM培养液配制细胞悬液，吹打均匀，
1 ~/ u9 `, B7 p4 [  a调整浓度为4×105个/ml接种于25 cm2培养瓶中。于37℃5％CO2培养箱中培养；24h后首次换液，之后隔日换液。' z$ K8 z9 y) O- `
（7）消化传代，2-3d按1：3传代，冻存备用。

christophe

我是0.25 Trypin/EDTA 消化8min+8min,中间晃一下皿，不知是否有点消化过了？

huangcong1988

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2 \4 V/ }4 D+ f: z; p呵呵，这个是我们师兄做的，具体条件可能还是要你自己摸索，他当时做的时候也是自己摸索的适合自己的最佳条件