跨内含子引物？

langziforever

回复 zerollx 的帖子/ z0 }* C! p* Y' D! E+ N
# }$ ^: ?9 y) I  v: D; _# c# U7 t2 [
所谓的跨内含子引物，故名思意就是这一对引物跨过一个内含子，我们知道真核生物基因组上的基因是有内含子和外显子组成的，而外显子被内含子说分隔开，但是内含子是不转录成mRNA的。这就是真核细胞内DNA和mRNA的区别，而我们一般用于检测目标基因转录水平时，使用RT-PCR或者realtime PCR，常常需要针对基因设计一对对的引物，一般来讲，在提取RNA的过程中，会带有基因组DNA的污染，所以，对于原核生物必须经过DNase酶消化去除DNA，而真核生物由于内含子的存在，我们可以设计引物分别在相邻的两个外显子上，这样DNA因为引物中间加了一个很大的内含子，而常常无法P出条带或者预计大小的条带，而RNA反转录后的目的条带是我们预期的，这样就可以免去DNA消化的步骤，通过设计这种跨内含子的引物来排除DNA的干扰，但是，并不是每个基因都能找到合适的引物在相邻的且大小合适的外显子上，所以，经常也会在一个外显子上设计引物，这时候就需要完全消化DNA才能得到可靠的结果，不知道我说清楚没有！二楼的说法实在无法认同！