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查看: 32174\|回复: 3	go [请教] plat-E细胞包毒培养 [复制链接]

ningtinglu

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楼主

发表于 2011-7-14 14:37 |只看该作者 |倒序浏览 |打印

这次做转染plat-E包毒，转的是micoRNA的质粒载体，结果杯具的没注意培养箱二氧化碳没了。隔了一天左右发现换到正常的培养箱，结果细胞根本长不动。个人理解是没有二氧化碳，对HCO3-的消耗很大，ph值发生变化以及HCO3-/CL-的交换等正常生理功能不能正常进行。但是没想到这个创伤是不可逆的，各位大侠有很什么见解。对不起师兄啊。。。

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金话筒优秀版主

沙发

发表于 2011-7-14 19:18 |只看该作者

像293T,293FT,plat-E这类细胞对环境的要求是非常敏感的，我曾经用未预热的培养基给细胞补液，镜下观察细胞状态很好，但是包毒时就是转不进去，实在不行就重新再转染吧

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runsong

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藤椅

发表于 2011-7-23 22:50 |只看该作者

对环境确实敏感。我从前传代时用枪吹得力度比较大，结果转入包装质粒后细胞全漂了，病毒的滴度也比往常低一个滴度。
不过包装细胞在包毒是就是不生长的，甚至还会往回缩，你遇到的现象可能是正常的。只要细胞还算形态饱满，不干枯，应该问题不大。
你们micoRNA的质粒载体用的是啥，我也在用慢病毒超表达microRNA，我用的是pll3.7。