plat-E细胞包毒培养

ningtinglu

这次做转染plat-E包毒，转的是micoRNA的质粒载体，结果杯具的没注意培养箱二氧化碳没了。隔了一天左右发现换到正常的培养箱，结果细胞根本长不动。个人理解是没有二氧化碳，对HCO3-的消耗很大，ph值发生变化以及HCO3-/CL-的交换等正常生理功能不能正常进行。但是没想到这个创伤是不可逆的，各位大侠有很什么见解。对不起师兄啊。。。

yangpan521

像293T,293FT,plat-E这类细胞对环境的要求是非常敏感的，我曾经用未预热的培养基给细胞补液，镜下观察细胞状态很好，但是包毒时就是转不进去，实在不行就重新再转染吧

runsong

对环境确实敏感。我从前传代时用枪吹得力度比较大，结果转入包装质粒后细胞全漂了，病毒的滴度也比往常低一个滴度。2 @' y: r1 L; y- K$ B7 n: U
不过包装细胞在包毒是就是不生长的，甚至还会往回缩，你遇到的现象可能是正常的。只要细胞还算形态饱满，不干枯，应该问题不大。
1 `: O& C, s' F  }1 U( u0 D4 B% b你们micoRNA的质粒载体用的是啥，我也在用慢病毒超表达microRNA，我用的是pll3.7。
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gaofei0515

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) B8 h9 |! C; c# N1 o楼主能分我一点Plat-E细胞么？现在买不到，实验进行不下去，谢谢了