关于间充质干细胞培养的一点经验

Learner

本人从年初开始接触MSC到现在或多或少积累了一点经验与大家分享。我一直采用的是DMEM-HG培养基，加进口血清。开始的时候用10%的FBS，细胞长势不算太好，用过20%的FBS成本高是一，还有人认为容易导致细胞老化。经过摸索现在用12%FBS细胞长的还挺好。在P0和P1,P2,P3阶段的培养我一般加4ng/ml的bFGF.；以后就不用了。我的细胞一般传到P7-P8就会老化，但是也看供体的年龄，有一些样品好的可以传到P11。但是太老了也不敢用来做诱导实验怕影响分化。细胞在传代过程中一定要离心去除胰酶。可能有的人一直这样做。但是我以前养别的细胞都不离心，胰酶消化后，加入含血清的培养基按一定比例传代加入新培养基即可。但是我发现MSC不喜欢胰酶的存在，哪怕一点点也有影响。还有一项是去除杂细胞的方法。P0长满后，用胰酶消化，虽然大部分细胞都挺好消化，往往有一些比较顽固的细胞形态比较像破骨细胞又大又圆比较耐胰酶。我第一次消化后用含血清培养基中和胰酶后转到离心管内。培养瓶用PBS再清洗一次，又加入1ml左右的胰酶放入37度孵育较长的时间不管细胞死活，只是将那些不易消化的杂细胞尽可能的消化下来。然后加入大量的PBS清洗，清洗下来的细胞就不要了，直接吸到废液缸里。将第一次消化下来的细胞离心，按一定比例传代（1:3，1:4，有时也用1:5）视细胞量的多少而定。2 R. l9 n9 k$ Q/ P9 g
希望这些经验会对各位有所帮助！

小颖

请问大家一般消化多长时间

tefuir

回复 hnsdlgl 的帖子2 a% ]' p7 _7 ^; D* ]( {1 e
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您好，我有几个问题想请教您一下，人脐带提取间充干应该注意的主要问题是什么？为什么我提取的间充干细胞长不起来，状态也不好？

tefuir

回复 yanmin 的帖子
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脐带间充干也可以穿很多代啊，我养的传到第5代也是很好的啊，正常来说组织块提取的间充干应该比酶消化法还要纯啊，是不是爬细胞的时候天数太多了，导致细胞出现分化的状况

tefuir

回复 yang179 的帖子
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这个时候用移液管把胰酶去除一些，确定不会吧细胞也带走一部分吗？

shenxl1988

生活处处皆知识

daisangwang

学习了

会飞的鱼

我们实验室不用血清终止消化，而是用培养基，这样对细胞有影响吗？$ h, X* x* Q* y" c

, g, o, p4 |( k1 Y4 ?# O3 m: y9 q( y. t1 C3 C) F

573639471

回复 yanmin 的帖子
7 R7 y! j- A3 P. W1 e
" r$ r/ P2 x. c/ U$ x1、我们没发现易分化的问题，你肉眼观察的还是检测的发现分化么？我做过P1和P8代的流式分析，差别不大，均满足细胞治疗协会对MSC定义的标准
! j7 p8 D% o% C% l9 D- s1 ]2 _2、原代经常不好消化，需要时间长一点；发现过不能吹散，很有可能是细胞太密了，不好消化也可能与细胞密度太高有关

573639471

回复 dophins 的帖子
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' S6 G3 J$ m) A) T& _容易分化你是怎么观察的，做过检测么4 J& n+ b+ f/ n2 [9 I