求助：成纤维干细胞原代培养

OBGYNob

不做实验不知道，一做实验吓一跳！原来自己真的什么都不懂....( w- R, ^' n9 S+ z  F
最近师傅又打算让我做成纤维细胞的培养，再做成iPSCs...打算用体表疤痕做材料，查看文献上说：可以用0.25%胰酶37℃消化30min以分离表皮与真皮。但是我消化之后表皮还是很难分离开啊，而且下面的真皮层好像不是文献上说的可以剪成0.5mm碎块，而是一坨...没办法很好的接种在培养瓶上啊{:3_60:} . \  a1 H# x8 Q! m* I6 _( _
请教各位高手，真皮层消化之后是变成一坨还是真的可以剪成很好的碎块？

chenlin080102

建议用胶原酶，我之前也是使用胰酶的效果也不好，换用胶原酶效果更好

alicia_86

胶原酶消化能力太强了，还是胰酶好一些

lh_kitty

换一把好的剪子

baiyunrui

我认为你可以把胰酶换成胶原酶，你那种情况我也遇到过，最后放弃了胰酶。并且胰酶对细胞损伤较大

OBGYNob

再次尝试组织块贴壁法+胰酶消化法，结果期待中...{:3_58:}

ziluo11

建议再查查文献，确定胰酶没有问题吧，再调整一下消化条件，比如时间什么的，不知道对不对，可以试试，祝你成功！

OBGYNob

宣告失败！！！！！

OBGYNob

回复 蓝O海 的帖子% F' G3 s& Y% ?0 n
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{:3_59:} 3Q.....

蓝O海

真皮剪了以后再用胰酶消化，看上去是一坨东西，但是只要你真的把它剪碎了的话，用培养基吹打一下他就会分开的。如果没分开那有可能就是没有剪彻底的原因。祝你实验顺利。:)