EB培养换液的问题 - 胚胎干细胞专区干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站

干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站 › 干细胞之家论坛 › 干细胞实验室技术交流 › 胚胎干细胞专区 › EB培养换液的问题



免疫细胞治疗专区	欢迎关注干细胞微信公众号

发新帖

查看: 20582\|回复: 5	go EB培养换液的问题 [复制链接]

Rank: 3 Rank: 3

积分: 435
威望: 435
包包: 1844

优秀会员小小研究员积极份子

楼主

发表于 2011-7-21 23:03 |只看该作者 |倒序浏览 |打印

第一次做干细胞EB分化，无LIF mES medium，细菌培养皿悬滴培养两天，然后加培养液悬浮培养了两天，现在发现大部分EB都是悬浮在培养液中（少部分贴壁），如果换液的话那悬浮的EB不是很容易被吸走吗？EB培养应该怎么换液呢？另外如果收集EB做RT或者western，应该怎么收集细胞呢？RT或者western各需要多少EB的量？

已有 1 人评分	威望	包包	收起理由
细胞海洋	+ 2	+ 10	欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 2 包包 + 10 查看全部评分

收藏0 分享0 顶0 踩0

回复引用

举报返回顶部

Rank: 7 Rank: 7 Rank: 7

积分: 947
威望: 947
包包: 3255

金话筒优秀版主

沙发

发表于 2011-7-22 08:51 |只看该作者

将培养液和细胞一块收集到15ml离心管内，1000转，室温，离心3分钟，倒掉上清液，用新鲜培养液重悬，在接种到新的细菌培养皿内，收集细胞都是用离心的方法，也可选择自然沉淀法，不过这种方法耗时太长，也容易丢失细胞

已有 1 人评分	威望	包包	收起理由
细胞海洋	+ 10	+ 20	欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 10 包包 + 20 查看全部评分

回复引用

举报返回顶部

Rank: 1

积分: 34
威望: 34
包包: 316

藤椅

发表于 2011-7-22 09:22 |只看该作者

其实很简单，就是旋转培养皿将EB聚集在培养皿中间，用移液管将旁边培养基吸掉即可。有少许贴壁可能是因为你悬浮培养时摇床旋转过慢或中间停止的缘故。做RT或western时直接消化就行。

已有 1 人评分	威望	包包	收起理由
细胞海洋	+ 10	+ 20	欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 10 包包 + 20 查看全部评分

回复引用

举报返回顶部

Rank: 3 Rank: 3

积分: 318
威望: 318
包包: 2219

优秀会员美女研究员

板凳

发表于 2011-7-22 09:45 |只看该作者

干细胞之家微信公众号

做RT或者WB时如果想分次收集样本，可以用口吸管吸取一定数量的EB，然后直接提取RNA或者蛋白就可以了，可以不用消化。

已有 1 人评分	威望	包包	收起理由
细胞海洋	+ 5	+ 10	欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 5 包包 + 10 查看全部评分

回复引用

举报返回顶部

Rank: 3 Rank: 3

积分: 435
威望: 435
包包: 1844

优秀会员小小研究员积极份子

报纸

发表于 2011-7-22 13:18 |只看该作者

回复 xiaxin1900 的帖子
J- f9 k$ Q; p* t/ L
我没用摇床，是直接用细菌培养皿静置放到37℃ CO2培养箱中培养的，请问你说用摇床的话，是把摇床放到培养箱里面还是把培养皿放到培养箱外面的摇床上啊？

已有 1 人评分	威望	包包	收起理由
细胞海洋	+ 2	+ 10	欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 2 包包 + 10 查看全部评分

回复引用

举报返回顶部

Rank: 1

积分: 34
威望: 34
包包: 316

地板

发表于 2011-7-22 13:42 |只看该作者

是把摇床放在培养箱中

已有 1 人评分	威望	包包	收起理由
细胞海洋	+ 2	+ 10	欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 2 包包 + 10 查看全部评分

回复引用

举报返回顶部

‹ 上一主题|下一主题 ›

发新帖

Archiver|干细胞之家 ( 吉ICP备2021004615号-3 )

GMT+8, 2025-6-9 05:18

Powered by Discuz! X1.5

© 2001-2010 Comsenz Inc.