基于载体的miRNA抑制剂表达克隆方案

runsong

本人想通过慢病毒表达miRNA抑制剂，不知各位高手有何良策，不胜感激。$ o4 |* v# q2 f

/ Q# c; v/ f1 i) @# [' @: k注：一些公司如复能基因推出过一些产品。但我问过，一个载体两千多元，老板是不会同意的。所以我想自己构建，基本构想是基于PLL3.7，模仿miArrest™（http://www.fulengen.com/product/mirna/inhibitor/），但其中的细节我查不到资料，如果有人能给以指点，万分感激。
* @9 q0 I% r, l- P       本人经过一年的打拼，在慢病毒包装，小RNA方面积累了一点实验材料与经验，希望与各位战友共享。

runsong

回复 深海寂寞鱼 的帖子0 J. T& B  e3 T  _7 b
$ P: D2 k; c- @/ Y" c
谢谢大师兄

runsong

回复 深海寂寞鱼 的帖子
; `( I+ S2 ?7 `, i) d9 d0 T! b" W" D8 a2 x
那我就把海绵加在pll3.7的U6后面。
+ `0 \/ V8 l& Y  {不过还想请教一下，如何经济高效地实现海绵单元的重复？

runsong

回复 深海寂寞鱼 的帖子
$ z& b, P" s5 C- {( ~% D5 O
# Q& i7 T; M5 b; V8 ~7 i不好意思，再打扰一下。你们的海绵单元一般重复几次啊。
0 w) \6 k8 u1 F1 b# n5 C( A其实我以前一直想做海绵，就是卡在经济高效地实现海绵单元的重复这里。

runsong

回复 snokey 的帖子
4 e# t0 K  S! s8 t# p) K) {" D, Y' R
8 y' i2 A# F" [7 E+ j你说的是这个意思吗？
6 y( ~$ }/ v$ E# j  M但我有一点疑问：loop部分一般只有8bp左右，而siRNA发挥作用仅靠这几个bp够不够？
! F- J" l. P# }* T  a9 ~7 u不过发明这个方法的人的确够牛的，神来之笔啊。

runsong

回复 sunny1987324 的帖子
: T$ m( ?3 _# D- }  O1 t, p: f# |
: I4 r3 J% {! H$ Y4 I, g  b$ [其实还是做模拟物的转染吧，买上海吉玛公司的，用脂质体转染就行。质粒、病毒啥的效率低。