实验求助！！急！！

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请问有谁做过微卫星吗，它是不是在DNA水平上检测基因组的遗传稳定性呢，能具体发我实验原理以及步骤吗 ，谢谢！！
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grape

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. c9 w: X4 l0 b" b6 j* Q1 U微卫星DNA（microsatellite DNA）% H7 Z/ E" k! X* D+ q' K
其他名称：短串联重复(short tandem repeat,STR,SSR)) }6 l% r: M* I5 ?
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定义1：一种简单串联重复DNA序列。其重复单位为1～6个核苷酸，由10～50个重复单位串联组成。在整个基因组中分布广且密度高。虽然其功能尚不清楚，但在遗传图和物理图的研究中是非常有用的工具。
, L( h# l. u' }0 H, I6 _应用学科：生物化学与分子生物学（一级学科）；核酸与基因（二级学科）
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定义2：2～6个核苷酸组成的重复单元串联重复(10～60次)而成的简单重复序列。6 }5 a# c+ p4 a8 u
应用学科：遗传学（一级学科）；基因组学（二级学科） 2 f3 o: U5 x' B3 ^0 b0 C! z
（全国科学技术名词审定委员会审定公布 ） 　　0 _2 h! W) {: [2 X3 d. b, @
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- q/ W1 p4 X: r+ i. T5 m" x微卫星DNA标记(microsatellite DNA)
# O; P* |- q4 l/ U) e8 A是近十多年发展起来的一种新型的分子遗传标记。它具有数量大、分布广且均匀、多态信息含量高、检测快速方便等特点，目前被广泛应用于动、植物基因定位、连锁分析、血缘关系鉴定、遗传多样性评估、系统发生树构建、标记辅助选择等方面。7 T. R; X' R, Z. v+ d1 d/ g/ G$ B$ g
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微卫星DNA，又称短串联重复序列(short tandem repeat, STR)或简单重复序列(simple sequence repeats, SSR)。微卫星DNA是在研究DNA多态性标记过程中发现的。1981年Miesfeld等首次发现微卫星DNA，其重复单位长度一般为1～6个核苷酸，双核苷酸重复单位常为(CA)n和(TG)n。 微卫星DNA广泛随机地分布于真核生物基因组中，在DNA序列中平均每6kb就可能出现一个，约占人基因组的10%，其基本构成单位(核心序列)为1-6bp，呈串联重复排列而成。其重复单位序列最短，只有2～6bp，串联成簇，长度50～100bp，又称为短串联重复序列（Short Tandem Repeat STR)。广泛分布于基因组中。 其中富含A-T碱基对。按核心序列碱基数不同可分别称为单二、三、四、五或六核苷酸，碱基组成分别有2(A/T,C/G)，4(AC/TG, AG/TC, AT/TA, CG/GC)10，102和350种。人类基因组中以(CA/GT)n，简称(CA)n重复序列最多，总共约有5×10……4-10……5个，即平均每6-60kbDNA就存在一个(CA)n，重复次数约15~16次；相应地，大鼠平均为18kb，小鼠平均为16kb，绵羊平均65kb(Crawford等，1995)。与其它DNA多态标记一样，微卫星DNA呈孟德尔共显性方式遗传(Winter, 1992)。Weber(1990)按照重复结构的不同，把微卫星标记分为完全重复型(perfect)、不完全重复型(imperfect)和复合型(compound)三种。完全重复型指由不中断的重复单位构成的微卫星；不完全重复型指重复单位中间有3个以下的非重复碱基，且其两端不中断的部分重复数大于3; 复合型指微卫星两端或两类以上的串联重复单位由不多于3个连续的非重复碱基分隔开，但各不中断的重复单位的重复数大于或等于5。# w6 v7 C9 {" R; r, H3 x

* C% w0 w1 \) s+ c) u9 B关于微卫星的产生机理
, t4 w+ H6 M. V- W- v; l/ n. Q多数学者认为是DNA复制和修复过程中的滑动错配或染色体减数分裂时姊妹染色单体不均等交换的结果(Tachida等，1992; Tautz等，1984)，微卫星在基因组中的功能尚不清楚，已发现微卫星能参与遗传物质的结构改变，基因调控及细胞分化等过程，有自身特异结合蛋白，尚能直接编码蛋白质，是一种非常活跃的碱基序列，微卫星核心序列是高度保守的，它与希氏大肠杆菌的Chi序列相似，揭示微卫星核心序列可能是与重组有关的蛋白质连接位点。微卫星可直接编码蛋白质，如脆性X综合症基因内(CGG)n串联重复，编码30个精氨酸；(CAG)n是人类基因库DNA序列外显子中发现最多的一种。另外，微卫星在促进染色体凝集，维持染色体结构等方面也有作用，可参与染色体折叠、染色体端粒形成等。(CA/GT)n、(GATA)n可能与致育性、性别分化、X染色体失活有关。" w/ ^  _3 H7 X. S7 U3 y6 j
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微卫星DNA具有多态性和保守性
% k2 [5 Z6 N7 w1 Y+ D  L微卫星位点由微卫星的核心序列与其两侧的侧翼序列构成，侧翼序列使某一微卫星特异地定位于染色体的某一部位，而微卫星本身的重复单位变异则是形成微卫星多态性的基础。在某一个体基因组中两条同源染色体的相对(侧翼序列相同)位置上如两侧翼序列间所包含的微卫星重复单位数相同与不同，则分别表现为纯合基因型和杂合基因型。微卫星的保守性表现在哺乳动物之间，特别是一些紧密相关的物种如牛与羊、马属动物之间以及鸡与火鸡之间具有一定程度的保守性。Moore等(1995)用牛的微卫星引物分别在羊、马及人的基因组中进行扩增发现，在羊中56%的引物可扩增出特异产物，其中42%的扩增产物表现出多态性；而在马及人中未扩增出多态产物。Levin等(1995)用48个鸡微卫星位点的引物，以火鸡的基因组DNA进行扩增发现：92%的引物可扩增出产物，33%的扩增产物经鉴定是与鸡同样的微卫星，其中28%的产物表现出多态性。由于微卫星引物在物种间的通用性，使得物种如牛、绵羊、山羊之间引物的互用成为可能。Gortari等(1997)研究表明；58%的牛引物可以在绵羊中扩增出特异产物且40%的扩增产物表现出多态性。Vaiman等(1996)的研究同样表明34%的牛引物以及绵羊引物在山羊中呈多态且其发表的第一个公山羊遗传图谱中的219微卫星标记中，有45个来自绵羊微卫星，164个来自牛微卫星。Schibler等(1998)在人的遗传图谱中寻找到了43个牛和绵羊的微卫星及34个山羊微卫星。许多研究结果表明反刍动物中的牛、绵羊和山羊3个物种在染色体水平上具有高度的相关性，因此，可用牛的微卫星标记引物来构建绵羊或山羊的遗传基因图谱。; L4 P+ ~' l: M, _1 ~9 H7 `
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微卫星DNA的检测方法
- t4 s* w% p' a4 J4 E* e微卫星DNA PCR扩增的高度灵敏性、高度特异性使得微卫星的检测十分方便而且准确。传统的方法是将PCR产物在非变性或变性聚丙烯酰胺凝胶中电泳进行基因分型。对于荧光素、同位素或生物标记的引物，可以采用其相应的显示方法，而对不带标记的引物可以银染后观察结果。荧光标记自动测序技术的发展使得微卫星DNA的基因分型变得快速、准确，从而大大地提高了微卫星标记分型效率和准确率，同时节约了实验成本和时间，使得应用微卫星进行了大规模基因组扫描成为可能。3 M9 i9 ]7 C' t% |6 e& E5 o7 {+ x7 g

( {/ d+ _8 _% ]! H( i获得所需要的微卫星位点的方法6 G, \& m8 @: \2 a- n5 K
微卫星具有很多优点，然而如何获得所需要的微卫星位点，一般有以下两种方法：一种是利用微卫星位点的保守性，从微卫星数据库中搜索出某物种已知微卫星引物，然后以相近物种的基因组总DNA为模板，用已知引物进行扩增并进行多态性分析，再对特异扩增产物进行测序，从而获得适合另一物种的高度多态的微卫星位点。另一种方法则是直接从基因组文库中筛选微卫星位点。近年来，“随机扩增微卫星DNA多态性”法和借助染色体显微切割等手段使得新微卫星位点的发现效率更高，更为简单。, S8 q) ?) U8 Y4 G5 {( ]
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微卫星DNA具有以下特点：9 ^  P* u, }8 R& k! m
⑴种类多、分布广，并按孟德尔共显性方式在人群中世代相传。在基因组中平均50kb就有一个重复序列，突变率低（< 0.04%）。( d; I3 P; ]3 N! h
⑵在人群中高度多态，其多态信息含量容量超过70%。其多态性表现为正常人群的不同个体某一基因位点重复序列的重复次数可不一样，同一个体的两个同源染色体上重复次数也可以不一样，即微卫星DNA拷贝数在人群中是可变的。
5 i: W' L. P9 w' q5 z! v- X⑶具有遗传连锁不平衡现象。
+ f- C7 a3 j. q* z" ?⑷均可被转录，有些编码蛋白质，而另一些则位于非转译区的5′端和3′端不编码蛋白质。3 i- x0 R  g8 z( i# A! n% H  w
⑸属于不稳定的DNA序列，其数目在某些遗传病中有扩大现象，而这种扩增并非是减数分裂的重组造成，扩大可发生在减数分裂过程中，由一代传递给另一代，也可发生在有丝分裂中，导致嵌合体形成。与成熟人体细胞比较，微卫星DNA在胚胎时期有丝分裂很不稳定。& ]3 e. k5 Z1 ^5 `2 B, g2 n
⑹在不同基因位点上的微卫星DNA的重复序列可以不同，也可以相同。1 q% p  @( @9 t
从理论上说，一种微卫星重复序列的寡核苷酸探针可确定人类基因内约20个不同位点的微卫星，假设有20种微卫星重复序列探针，即可对人类任何基因组位点进行定位，这是一个诱人的应用前景。
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" D, w' R$ U% }6 p* W# f3 R3 D微卫星DNA标记的应用：
! j( H% I1 R" p6 y2 F: n微卫星标记可应用于遗传多样性的分析与评估" {. W9 t; N8 L# m
生物个体表现出的各种遗传变异，在本质上就是DNA的差异，因此通过研究DNA的变异来分析群体的遗传结构及遗传多样性则更为直接，Arranz等(1996)对牛的微卫星和蛋白质标记的比较研究发现微卫星标记比蛋白质标记具有更加丰富的多态性，且其两者所得到的系统发生树基本上是一致的。这些都说明，微卫星在研究亲缘关系较近的群体遗传关系时是较优越的标记之一。van-zeveren等(1995)利用7个微卫星标记对4个比利时猪种进行了研究，通过等位基因频率、多态信息含量(PIC)、遗传杂合度、有效等位基因数及品种内个体相似概率等5个指标的比较，得出了品种内的遗传差异和遗传关系。Li等(2000)用微卫星方法对中国七个地方猪种遗传多样性的研究表明，中国地方猪种的遗传多样性高于外来品种，七个品种的聚类与它们的地理分化时间大致吻合。MacHugh等(1996，1997，1998)借助20个微卫星标记对7个欧洲牛品种，6个非洲牛品种和4个亚洲牛品种的遗传结构进行检测，分析了各个牛品种内的遗传变异及品种间的遗传关系，并对来自三大洲的普通牛和瘤牛起源，驯化和系统发生关系做好了深入探讨。Zhou等(1999)对23个高度近交系鸡的42个微卫星位点进行了分析，绘制了系统发生树，结果表明微卫星在遗传多样性的研究上是准确可靠的。Morin等(1994)用人源微卫星位点来检查自由生活状态下的黑猩猩种群的亲缘关系、社会结构和 子关系，使其得以验证种群内关于亲缘关系的假说。
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附几篇引用次数较多的文献及相关技术资料：
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liuyunhui2004

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) u8 Q; k: v3 C6 _# q( Q很热心，很负责，很给力……颁奖