96孔板做流式的方法

bljxs

介绍一种刚学到的做流式的方法，既快捷又简便，还省抗体，效果挺好，可以一次性处理很多个样本。
2 A9 X3 @3 h0 Q6 `/ m; ^/ a收集细胞，96孔板每孔1X105（考虑到损失，保守2X105），1300 转/分离心5分钟。4 c7 U3 c0 d: z4 E5 c; E' o; Z6 o
弃上清，每孔加入10μl PBS，振荡器振荡数秒，使细胞松散，避光条件下每孔加入1μl CD34、CD45抗体，振荡器振荡数秒混匀，2～8℃冰箱放置20分钟，每10分钟振荡器振荡数秒混匀。
; y, \$ I8 l" O! U9 _$ p  l每孔加入190μl PBS，吹打混匀，1300 转/分离心5分钟。
$ p; A' z( ]/ v8 a弃上清，加入100μl PBS重新悬浮细胞，再加入100μl 2%多聚甲醛，转移至流式细胞管。4 J! F2 b) E. m8 Z- y  O0 @1 J( O& W
流式管外予以锡纸密封，避光，2～8℃保存待检。9 B/ f# X& K, b$ j

123jiaoyue

回复 bljxs 的帖子' d9 E; `8 b1 U! r& [' {) V
, A) {) r, w3 m( n
你应该说说你做的什么细胞 是否贴壁  上流式的目的是做什么这样才更有参考价值

皮搋子

弃上清，每孔加入10μl PBS。这个弃上清是怎么个弃法？
1 Z4 q$ w5 x  d
$ L1 c' i$ K& I吸取？倒掉？洗去？洗板机？
. ]6 y9 l5 t/ J$ u. t2 X
4 Y$ T/ h8 c2 p8 q: U$ N0 j% [! i

savid888

"96孔板每孔1X105（考虑到损失，保守2X105）": I- E3 e+ b, T7 r. j
不可能！" ?6 [! R4 k& a% X4 \2 m+ |" H

bljxs

回复 123jiaoyue 的帖子
* K5 [4 a2 v- ?" r+ E  I! Y2 g5 U- U: ~  r
贴壁细胞和非贴壁细胞都可以啊，只要最后收集到离心管里，细胞计数后分至96孔板，只要用到流式细胞仪的都可以用这个方法，我做了CD34和CD45，检测了12管，三个小时就搞定了，如果用离心管做的话是非常麻烦的。

bljxs

回复 savid888 的帖子$ d$ z( L' q9 Y

9 K( E- b/ y/ t$ z5 \, b- e# ~  f1 i不可能是什么意思啊，96孔板一个孔培养不出来？又不是在96孔板直接培养后做的，是细胞收集后在国产非贴壁的96孔板里实施加抗体的过程。

bljxs

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; Y* g- Y$ o7 w  a$ Y0 |) Q& q4 a! K; h& g' j- A
对着水池轻轻一甩，然后在纸上轻轻蘸一下，立马就吸走了，纸要事先准备好放在水池边上，这个动作要轻柔点，细胞容易丢失掉。

savid888

回复 bljxs 的帖子7 Q% p; B' a0 L2 F" m: l
9 O# o2 _, @, F5 ^3 k& B
sorry
7 |0 ^$ s- `8 f+ p, ~- V! I没理解你在顶楼的帖子，不过看了你5楼的帖子，弄懂了。% O, m5 B9 T  T
多谢介绍经验。
$ ~, L: S) d) z/ o. W/ U  YBTW，你这种方法需要能直接离心板子的离心机吧

bljxs

回复 savid888 的帖子7 ~5 v: I8 g3 @; B8 |2 n. f8 U  b
" [$ C0 r! Q6 ?9 b: e
是的，要用那种吊篮的。