96孔板做流式的方法

bljxs

介绍一种刚学到的做流式的方法，既快捷又简便，还省抗体，效果挺好，可以一次性处理很多个样本。, P5 s& \: X8 ]! u& s9 t
收集细胞，96孔板每孔1X105（考虑到损失，保守2X105），1300 转/分离心5分钟。4 U9 J% r/ Q  H, e& c
弃上清，每孔加入10μl PBS，振荡器振荡数秒，使细胞松散，避光条件下每孔加入1μl CD34、CD45抗体，振荡器振荡数秒混匀，2～8℃冰箱放置20分钟，每10分钟振荡器振荡数秒混匀。
/ j# F* |' X( p3 N# R每孔加入190μl PBS，吹打混匀，1300 转/分离心5分钟。/ N, V: L$ k' r& p
弃上清，加入100μl PBS重新悬浮细胞，再加入100μl 2%多聚甲醛，转移至流式细胞管。/ }3 y2 y: Y3 N; ]5 ^
流式管外予以锡纸密封，避光，2～8℃保存待检。
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123jiaoyue

回复 bljxs 的帖子3 W. V6 k: K, r+ [  d2 u
& p" i1 N6 z- ]
你应该说说你做的什么细胞 是否贴壁  上流式的目的是做什么这样才更有参考价值

皮搋子

弃上清，每孔加入10μl PBS。这个弃上清是怎么个弃法？6 E* i9 u0 k7 @

2 i% ~8 K; a1 a" D吸取？倒掉？洗去？洗板机？
! R* {! _! ]1 G
' S& @: n7 D+ _0 }1 L

savid888

"96孔板每孔1X105（考虑到损失，保守2X105）"9 T3 \% o0 \9 e8 U
不可能！
( ?2 m/ s! x$ r7 F+ N

bljxs

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5 G; @  {  P2 ~2 Z& u% ~
7 K+ J: U" V& ]贴壁细胞和非贴壁细胞都可以啊，只要最后收集到离心管里，细胞计数后分至96孔板，只要用到流式细胞仪的都可以用这个方法，我做了CD34和CD45，检测了12管，三个小时就搞定了，如果用离心管做的话是非常麻烦的。

bljxs

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5 U) m* r6 T; B3 P, Y" N2 Y; Z, E+ k/ p9 E  t2 U* V1 B1 O
不可能是什么意思啊，96孔板一个孔培养不出来？又不是在96孔板直接培养后做的，是细胞收集后在国产非贴壁的96孔板里实施加抗体的过程。

bljxs

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$ ?$ w% |* ~. F5 c2 u, @
9 u3 d0 w/ N- W% M1 A2 L! ^1 @对着水池轻轻一甩，然后在纸上轻轻蘸一下，立马就吸走了，纸要事先准备好放在水池边上，这个动作要轻柔点，细胞容易丢失掉。

savid888

回复 bljxs 的帖子. w, _* a( z! I9 r9 t! C

4 p4 N8 I; i8 Q2 m9 {- \# hsorry
5 F& B5 h2 T, c没理解你在顶楼的帖子，不过看了你5楼的帖子，弄懂了。
4 g* `6 A% h; O# u) f多谢介绍经验。+ x' j# r2 O4 t) b
BTW，你这种方法需要能直接离心板子的离心机吧

bljxs

回复 savid888 的帖子5 v. U( h% _$ `( ], }" Y5 w
! n7 _, T5 D- f6 v' A" y
是的，要用那种吊篮的。