96孔板做流式的方法

bljxs

介绍一种刚学到的做流式的方法，既快捷又简便，还省抗体，效果挺好，可以一次性处理很多个样本。, M8 Z8 q* U6 {) r% h7 M
收集细胞，96孔板每孔1X105（考虑到损失，保守2X105），1300 转/分离心5分钟。
, t6 J" ?3 @9 \/ C弃上清，每孔加入10μl PBS，振荡器振荡数秒，使细胞松散，避光条件下每孔加入1μl CD34、CD45抗体，振荡器振荡数秒混匀，2～8℃冰箱放置20分钟，每10分钟振荡器振荡数秒混匀。8 m" [5 e0 y5 Q$ Q
每孔加入190μl PBS，吹打混匀，1300 转/分离心5分钟。) H2 s: S7 x( S6 Y: @+ J
弃上清，加入100μl PBS重新悬浮细胞，再加入100μl 2%多聚甲醛，转移至流式细胞管。
8 a9 C9 l+ e" V( q7 @0 k$ B& ?流式管外予以锡纸密封，避光，2～8℃保存待检。. A! Q- b; {6 g2 N, H+ B; Y) L  t

123jiaoyue

回复 bljxs 的帖子5 M; Q$ X0 N! z  `
& U$ q% V+ r1 ^: Q
你应该说说你做的什么细胞 是否贴壁  上流式的目的是做什么这样才更有参考价值

皮搋子

弃上清，每孔加入10μl PBS。这个弃上清是怎么个弃法？2 V  T5 X& l4 ]- T! z! v4 I7 T; d

% ^* T5 H3 G& C) C$ e& B吸取？倒掉？洗去？洗板机？
4 R/ a4 v8 y+ G- a. ]
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savid888

"96孔板每孔1X105（考虑到损失，保守2X105）"
1 m- l" \; F$ N' h9 S; l2 E" W不可能！
3 Z) S2 _# Q5 m7 p

bljxs

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8 T& }, }& P: O8 T* p) q* v' c9 G4 C: J) B$ o
贴壁细胞和非贴壁细胞都可以啊，只要最后收集到离心管里，细胞计数后分至96孔板，只要用到流式细胞仪的都可以用这个方法，我做了CD34和CD45，检测了12管，三个小时就搞定了，如果用离心管做的话是非常麻烦的。

bljxs

回复 savid888 的帖子2 H7 {0 ~! Z- p1 [" L
- ^2 S8 t0 E7 v
不可能是什么意思啊，96孔板一个孔培养不出来？又不是在96孔板直接培养后做的，是细胞收集后在国产非贴壁的96孔板里实施加抗体的过程。

bljxs

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- E+ ?, @0 t0 l3 l5 x  d2 w5 Q, D' u" E0 x# H7 g/ u
对着水池轻轻一甩，然后在纸上轻轻蘸一下，立马就吸走了，纸要事先准备好放在水池边上，这个动作要轻柔点，细胞容易丢失掉。

savid888

回复 bljxs 的帖子0 \( p- s  T4 \3 i
( I! ?' p, ~. I4 C. L; i' E# i
sorry
; x! J& R! F4 W0 J没理解你在顶楼的帖子，不过看了你5楼的帖子，弄懂了。( ]$ |, S0 N! J4 m# P6 X
多谢介绍经验。
' o8 f/ V# E2 e$ w2 E, c0 `BTW，你这种方法需要能直接离心板子的离心机吧

bljxs

回复 savid888 的帖子
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是的，要用那种吊篮的。