干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站

 

 

搜索
朗日生物

免疫细胞治疗专区

欢迎关注干细胞微信公众号

  
查看: 15223|回复: 2
go

[请教] 96孔板筛选ES细胞的问题 [复制链接]

Rank: 7Rank: 7Rank: 7

积分
150 
威望
150  
包包
2610  
楼主
发表于 2011-8-11 16:01 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
我正在筛选打靶的ES细胞,克隆接种到96孔板中,PCR鉴定。但第一步提取DNA就出现了问题,第一次我将沉淀的黏糊糊的DNA转移到1.5ML的离心管中14000rpm离心15min,但最后洗完了,没看到白色的DNA沉淀,这是为什么啊,而且测浓度也没有,难道DNA太大,不能贴到管底?
' F, R2 i- {" k# a+ {& [! Z第二次我直接将96孔板反扣过来,这次感觉是反过来的时候速度太快,有些DNA倒掉了,请教下大家都是怎么弄的啊?
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 5 + 10 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 5  包包 + 10   查看全部评分

Rank: 2

积分
132 
威望
132  
包包
929  
沙发
发表于 2011-8-12 09:05 |只看该作者
分子克隆里,有一个提取96孔板细胞专门做PCR的方法,你可以看一下。我现在也在做gene targeting,不过是在6孔板里提取基因组。我们是挑单克隆后先在24孔板里培养,然后一部分冻存一部分转到6孔板里提取基因组,工作量很大,想问一下你们是怎么做的?
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 5 + 10 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 5  包包 + 10   查看全部评分

Rank: 3Rank: 3

积分
308 
威望
308  
包包
1432  

优秀会员

藤椅
发表于 2011-8-12 09:07 |只看该作者
你用提取DNA的盒子提的吗?第一次你转移到1.5ML的离心管中时,黏糊糊的那不是DNA,是变性的蛋白质,我们都是按照盒子的说明书提取的。
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 5 + 10 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 5  包包 + 10   查看全部评分

‹ 上一主题|下一主题
你需要登录后才可以回帖 登录 | 注册
验证问答 换一个

Archiver|干细胞之家 ( 吉ICP备2021004615号-3 )

GMT+8, 2025-5-3 02:38

Powered by Discuz! X1.5

© 2001-2010 Comsenz Inc.