为什么检测miRNA要用茎环状结构的RT引物？

runsong

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      通过PCR检测目的片段必然要求目的片段有合适的长度。miRNA所对应的cDNA太短，无法设计PCR引物，势必要求在反转录阶段对cDNA进行加长。这一点是随机引物不能满足的。9 T* |# p! B, H$ o! Y
      miRNA的反转录是准特异性的，即特异性地反转录末尾与RT引物末端6到8个碱基反向互补的RNA，注意这是通过两个条件使RT引物和miRNA拼合成完美的发卡结构，此结构稳定性高，可以大幅增强特异性，miRNA的cDNA产量就随之提高了。& L! e5 E% y) p
      反转录得到的cDNA是RT引物顺着miRNA反转录得到的，反转录完成后体系中会残留很多未参与反应的RT引物，为了不影响接下来的PCR，必须使上游引物末端与RT引物末端不能有超过2bp的重合，否则RT引物就会成为模板参与PCR反应。
" v8 W, {) L8 t2 @$ P3 _      希望我能解释清楚，不过楼主的文字写得有点随意，有的地方我没读通。

runsong

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, I6 V9 i* z6 x0 j8 e我快毕业了，最近比较忙。你把你的手机号码发到邮箱5595758@163.com里，电话里说吧。其实我设计的引物也不太好。至于那一条是我自己揣摩的，没有文献支持。