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[请教] 原代MEF消化   [复制链接]

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楼主
发表于 2011-8-15 11:54 |显示全部帖子
本帖最后由 runsong 于 2011-8-15 11:57 编辑 ; f; U. T& Z8 z! Z! V

6 }7 |) d9 |1 H; ]这是很正常的,MEF原代培养简单的话就先仔细剪碎,至少剪300下,再加入大量胰酶(不要小气)37℃消化20min左右,成为粘稠透明状液体。用3倍于胰酶体积的培养液中和,直接接入培养皿里就行了。粘液里的细胞会自己迁出、贴壁的。待其贴壁后及时换液。
# N! m/ S- c& o0 ^4 e有两点需要注意:1、要充分剪碎,2、要用充足的胰酶。
3 Y& O  m8 [/ j有两点无需注意:1、不必消化为单细胞,2、培养液里的胰酶不太影响细胞生长。(如果不放心的话可以中和后离心,弃掉一些液体,不过不要弃掉粘液,上清也弃不多)
/ f% c2 k9 Z4 o5 U; k. ?2 _' y! M; H. x: B% H0 f; L$ B
补充一点:我不是牛人,四楼坐板凳的才是。
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沙发
发表于 2011-8-15 18:16 |显示全部帖子
回复 nibirucome 的帖子! j& u" ~- U  T$ Y# V2 z
, R( k; L3 d8 p3 W) O& `) {2 P
是的,但这也是无奈之举。* X0 d' ~) ~. r/ e, _
胰酶并不适合做mef,很难消化为单细胞。选用其他的方法其他的酶效率会高几倍。
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藤椅
发表于 2011-8-15 18:17 |显示全部帖子
本帖最后由 runsong 于 2011-8-15 18:20 编辑
7 M! p, H$ x  U& ]( L
: S' Q7 N8 F6 r5 _* O( @( ^8 o回复 nibirucome 的帖子; k& ?. _& n0 m1 t

$ m1 t3 S4 l8 l) u# |; ~$ m/ }" E  Q5楼的方法应该可以,
: [$ y( a; z9 k& R5 m" s, J不过好像应该是0.05%的trypsin
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