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[请教] 原代MEF消化   [复制链接]

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楼主
发表于 2011-8-15 11:54 |显示全部帖子
本帖最后由 runsong 于 2011-8-15 11:57 编辑
' @& }' m5 A( n2 A4 C1 R6 E, r! Q" w$ D/ W& l% {/ ?/ R
这是很正常的,MEF原代培养简单的话就先仔细剪碎,至少剪300下,再加入大量胰酶(不要小气)37℃消化20min左右,成为粘稠透明状液体。用3倍于胰酶体积的培养液中和,直接接入培养皿里就行了。粘液里的细胞会自己迁出、贴壁的。待其贴壁后及时换液。" C. B8 D. P9 d: U, ?( @/ e, P
有两点需要注意:1、要充分剪碎,2、要用充足的胰酶。! R' n8 J/ p! u" i  m! G
有两点无需注意:1、不必消化为单细胞,2、培养液里的胰酶不太影响细胞生长。(如果不放心的话可以中和后离心,弃掉一些液体,不过不要弃掉粘液,上清也弃不多); J4 Q; J, C/ ]
/ j9 n; x' t' {1 H
补充一点:我不是牛人,四楼坐板凳的才是。
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沙发
发表于 2011-8-15 18:16 |显示全部帖子
回复 nibirucome 的帖子1 \8 o3 }, y3 P

) q: v4 k! s7 _- P* J. c是的,但这也是无奈之举。
7 s) L9 d. K- r6 p) n/ T# X9 t  j胰酶并不适合做mef,很难消化为单细胞。选用其他的方法其他的酶效率会高几倍。
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藤椅
发表于 2011-8-15 18:17 |显示全部帖子
本帖最后由 runsong 于 2011-8-15 18:20 编辑 $ |- Y3 F: D6 n8 S8 i
7 q, ?% [9 V: H& `2 D
回复 nibirucome 的帖子
( H- R- G% z/ w9 Q# ~, q
! I5 q( ?; L1 H1 T4 @& J8 @! |5楼的方法应该可以,1 T) c; U' i6 u, l
不过好像应该是0.05%的trypsin
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