细胞增殖检测BRDU/EDU/ki67

shqinzhu

如题请教，上面三种检测细胞增殖能力，哪一种最好？发表文章的接受度比较好？

fengxuechunyang

我对此也很感兴趣，在文章中几次见到用BRDU，ki 67来标记新生神经元，意义可能同标记细胞增殖的相同吧。希望大家积极讨论，一起进步！

savid888

马克一下，看看高人的解释

wang3033

1.最好的检测细胞增殖指标排列如下，EDU>BRDU>Ki67
" p/ C, U# x/ l5 T2. EDU和BRDU都是细胞增殖时能够插入正在复制的DNA分子中的核苷类似物，他们的原理相同；但是EDU的检测方法与传统的(BrdU)检测方法相比，更简单，更快速，更准确。EdU只有BrdU抗体大小的1/500，在细胞内更容易扩散，不需要严格的样品变性(酸解、热解、酶解)处理，有效地避免了样品损伤，有助于在组织、器官的整体水平上观测细胞增殖的真实情况，具有更高的灵敏度和更快的检测速度。
4 a! U  {7 u4 i# i3.Ki67是一种增殖细胞相关的核抗原,其功能与有丝分裂密切相关,在细胞增殖中是不可缺少 ,  但其确切机制尚不清楚，Ki67作为标记细胞增殖状态的抗原。 与EDU和BRDU相比，Ki67是间接指标。
' {0 i$ p+ }+ t. y. Q6 t+ G5 B
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fengxuechunyang

学习了，楼上的好专业！

angelyannan

回复 wang3033 的帖子
3 C2 h  Q+ M' p, G) d
% w9 A0 Q' l6 i* P* B, i+ x. d! _0 U请问使用brdu检测细胞增殖的话，一般在体外培养的细胞中，添加brdu孵育多长时间是比较合理？孵育时间是否根据不同的细胞类型有不同的依据呢？以前一直是依照文献来尝试的，可是具体的效果还是说不清楚的。希望您能帮忙解答，谢谢！

wang3033

回复 angelyannan 的帖子- ?, L- i6 k  d4 L

, o( a1 f6 x" r7 K0 i) C; r# E$ n添加brdu孵育多长时间？孵育时间与不同的细胞类型是否相关？
9 X% H: ?' R$ D% f9 t. \4 ]  A0 C3 {5 X以上两点都需要自己摸索，可在12孔板中的不同孔中加入brdu后，分别孵育2h,4h,12h,24h,48h等。只要实验条件设置合适，实验结果应该满意。

angelyannan

回复 wang3033 的帖子  S/ b2 O1 U% v9 Z1 }) ~2 f
; U+ ^$ W6 h1 {- n: @. \' o" m
谢谢了

angelyannan

回复 wang3033 的帖子* W& X; `, r1 `: }

- w# n5 ]7 z& ]* I6 r, V有brdu影响细胞活性的文献，所以是不是brdu的添加浓度和时间段都需要在一定的范围内呢？我个人看到的相关文献中使用10μM,2hr的比较多。尝试过八小时的倒是觉得能够检测出差异，可是导师说没有文献依据。真是很苦闷呢。

yyyan126

你是做什么细胞的？我做神经元增值测试是使用10uM的BRDU，神经元在体外培养4天后加入brdu，37℃孵育24小时进行免疫组化。